| 一种新的基于适体和酶切保护分析的超灵敏蛋白质检测方法 |
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| 引用本文： | 王先良,王小利,苏艳华,张迟,张莉君,李芳,李柏生,李晓波,徐淑雷,李媛媛,徐顺清.一种新的基于适体和酶切保护分析的超灵敏蛋白质检测方法[J].中国生物化学与分子生物学报,2005,21(3):420-425. |
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| 作者姓名： | 王先良 王小利 苏艳华 张迟 张莉君 李芳 李柏生 李晓波 徐淑雷 李媛媛 徐顺清 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院环境医学研究所,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(No.30170051，No.30170903)~~ |
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| 摘 要： | 以凝血酶适体(aptamer)为例,利用适体和核酸外切酶特性,通过定量PCR扩增建立一种高灵敏的蛋白质检测方法.首先合成3段寡核苷酸序列即凝血酶适体探针,上游连接子和下游连接子.将适体探针与凝血酶温育结合后,再加入核酸外切酶I降解未能结合的探针.接着将保护下来的探针与连接子杂交、连接和对连接产物进行定量PCR .分别建立连接产物标准品浓度与Ct 值的标准曲线和凝血酶浓度与连接产物浓度的标准曲线,通过定量PCR对凝血酶进行定量.结果显示,基于适体的外切酶保护凝血酶检测方法灵敏度较高,连接产物标准品浓度的对数值和Ct 值之间的方程为y =- 2 95x + 33 6 5 (R2 =0. 990 ,P <0 .0 1) ;凝血酶浓度和连接产物浓度对数值之间的方程为y =0 94x - 0 . 2 9(R2 =0 . 998,P <0 . 0 1) ,还对可能影响检测的有关参数举行了探讨.
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| 关 键 词： | 蛋白质检测 适体 酶切保护分析 实时PCR 凝血酶 |
| 收稿时间： | 2005-06-20 |
| 修稿时间： | 2004年8月25日 |
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