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| 组氨酸标签位置对重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响 | |
| 作者单位： | ;1.中国科学院大连化学物理研究所天然产物与糖工程研究组;2.大连大学医学院;3.中国科学院大学;4.中国科学院过程工程研究所 |
| 摘 要： | 为了研究His_6-tag标签位置对鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶(Kluyveromyces cicerisporus CBS4857 exo-inulinase,KcINU1)酶活性的影响,实验首先根据Swiss-Model构建的KcINU1三维模型预测了组氨酸标签在KcINU1的位置,然后将编码His_6-tag的基因通过PCR方法分别引入到kcINU1的N端和C端,并将重组的kcINU1基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA,重组质粒进一步经电转化法整合到毕赤酵母宿主菌X-33中,最后用甲醇诱导进行分泌表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,DNS去进行外切菊粉酶的活性测定。结果显示,实验中成功表达了具有活性的、His_6-tag标签位置不同的重组蛋白,并且N-His_6-KcINU1糖基化程度比KcINU1-His-C高,后者的比活是前者的82.2%,表明N端携带His_6-tag标签不影响蛋白的糖基化修饰,可以保持较高的酶活。该研究为获得高活性且便于分离纯化的重组KcINU1奠定了基础,对糖苷水解酶32家族标签位置的选择具有指导意义。 |
| 关 键 词： | 组氨酸标签位置 鹰嘴豆孢克鲁维酵母 外切菊粉酶 酶活性 糖苷水解酶32家族 |
The Effects of His_6-tag Position in Kluyveromyces cicerisporus Exo-inulinase on Its Activity |
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