| 牙鲆钙调素基因在原核和真核细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 吕爱军,胡秀彩. 牙鲆钙调素基因在原核和真核细胞中的表达[J]. 动物学报, 2008, 54(6) |
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| 作者姓名： | 吕爱军 胡秀彩 |
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| 作者单位： | 徐州师范大学生命科学学院,江苏徐州,221116 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(No·30800847); 江苏省高校自然科学基金资助项目(No·08KJD240002); 江苏省重点学科基金资助项目(No·SYC0703); 徐州师范大学自然科学基金资助项目(No·KY2007042)~~ |
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| 摘 要： | 设计特异引物，以SMART cDNA为模板，应用PCR方法扩增牙鲆钙调素基因（Paralichthys olivocew calmodulin，PoCaM）。计算机辅助分析表明，PoCaM基因编码149个氨基酸的推定蛋白，其分子量为17kD，等电点为3．93，含有4个螺旋-环-螺旋样结构，与其它鱼类CaM氨基酸一致性为97．3％-100％。构建原核表达重组质粒pET32a／PoCaM，转化大肠杆菌B121（DE3），用IPTG进行诱导表达，经SDS—PAGE蛋白电泳，结果显示PoCaM在大肠杆菌中进行了特异性融合表达，融合蛋白分子量约为34kD，与预期分子量大小一致。同时，以绿色荧光蛋白（GFP）为表达标签，构建真核表达重组质粒pEGFP—N3／PoCaM，经Lipofectamine 2000介导转染鲤鱼上皮瘤细胞（ Epithelioma papulosum cyprinid, EPC），荧光显微镜观察显示，PoCaM在EPC细胞中进行瞬时表达，主要分布于细胞核及胞浆中[动物学报54（6）：1061—1067，2008]。
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| 关 键 词： | 牙鲆 钙调素基因 原核表达 真核表达 |
Expression of flounder Paralichthys olivaceus calmodulin gene in prokaryotic and eukaryotic cells |
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| Lv Ai-Jun,HU Xiu-Cai. Expression of flounder Paralichthys olivaceus calmodulin gene in prokaryotic and eukaryotic cells[J]. Acta Zoologica Sinica, 2008, 54(6) |
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| Authors: | Lv Ai-Jun HU Xiu-Cai |
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| Abstract: | The primer was designed based on the sequence which was obtained from subtractive cDNA library,and then cloned the flounder Paralichthys olivaceus calmodulin gene(PoCaM)using SMART cDNA as the model.Computer-assisted analysis revealed the potential open reading frame encoded a protein of 149 amino acids with a predicted size of 17 kD,the predicted theoretical isoelectric points(PI)is 3.93.Sequence alignment of PoCaM with other well known calmodulin proteins showed a significant homology with identity of 97.... |
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| Keywords: | Flounder Calmodulin gene Prokaryotic expression Eukaryotic expression |
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