PTD融合蛋白的原核表达及其抗体制备

目的：为制备凋亡素重组蛋白抗体，首先获得凋亡素重组蛋白融合基因LTA，而且通过原恢表达系统表达重组蛋白并制备其抗体，为进一步利用凋亡素重组蛋白导向治疗肿瘤的检测奠定基础。方法：应用重叠延伸的基因融合技术将LHRH（黄体生成激素释放激素）基因、TAT（HW—1反式转录激活因子）基因和凋亡素基因重组，构建成凋亡素重组蛋白原核表达载体pET-28α～LTA，随后将表达质粒转入BL21菌株，经IPTG诱导表达重组融合蛋白，将已表达的重组蛋白通过Ni—NTA亲和色谱柱进行纯化，并制备LTA凋亡素重组蛋白抗体。结果：表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测．LTA蛋白融合基因获得高效表达，凝胶薄层扫描分析表明表达蛋白占菌体蛋白12．6％。LTA蛋白经Ni—NTA亲和色谱柱柱纯化，以纯化蛋白为抗原免疫獭兔制备凋亡素重组蛋白抗血清。结果表明抗体的效价为1：12800。结论：应用重叠延伸的基因融合技术获得凋亡素重组蛋白融合基因LTA，通过原核表达系统表达重组蛋白并制备其抗体。