| 一种微管-荧光融合蛋白嵌合标记斑马鱼运动神经元系统的建立 |
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| 引用本文： | 袁芳,钱佩佩,王新,盛佳婧,刘东,巩杰.一种微管-荧光融合蛋白嵌合标记斑马鱼运动神经元系统的建立[J].生理学报,2022(3):411-418. |
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| 作者姓名： | 袁芳 钱佩佩 王新 盛佳婧 刘东 巩杰 |
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| 作者单位： | 1. 南通大学生命科学学院;2. 南通大学医学院;3. 南通大学神经再生重点实验室 |
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| 基金项目： | supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 81870359)；;the Natural Science Foundation of Jiangsu Province,China (No. BK20180048, BRA2019278)； |
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| 摘 要： | 运动神经元是一类支配运动行为的重要神经元。传统的荧光蛋白标记的转基因斑马鱼品系(用于活体成像分析运动神经元形态发生)存在胞体密集、突触交错、不好区分单个神经元等不足。为了优化活体成像分析运动神经元，本研究旨在建立一种微管-荧光融合蛋白嵌合标记斑马鱼运动神经元系统。首先通过Gateway克隆技术将运动神经元表达基因mnx1启动子序列与绿色荧光蛋白-α-Tubulin融合蛋白序列构建到含有Tol2转座位点的表达载体中，然后将该质粒和Tol2 mRNA同时注射到4～8细胞期斑马鱼受精卵中，在72 hpf (hours post fertilization)进行共聚焦显微成像分析。结果显示，该系统中绿色荧光融合蛋白在3种类型运动神经元中表达，从而实现单个运动神经元嵌合标记。本研究进一步探索注射剂量与嵌合标记神经元数量以及分布频率的关系，并确定了重组蛋白的合适剂量(15 ng)。此外，本研究在该模型上验证了insm1a和kif15表达下调导致的运动神经元异常发育。这些结果表明我们成功建立了一种微管-荧光融合蛋白嵌合标记斑马鱼运动神经元系统，为探究运动神经元的发育和形态发生提供了一个直观和快速的模...
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| 关 键 词： | 转基因 嵌合体 运动神经元 斑马鱼 |
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