| 重组旋毛虫plancitoxin-1-like活性位点突变体蛋白的核酸酶活性 |
| |
| 引用本文： | 廖成水,王晓利,田文静,张梦珂,张春杰,李银聚,吴庭才,程相朝. 重组旋毛虫plancitoxin-1-like活性位点突变体蛋白的核酸酶活性[J]. 生物工程学报, 2017, 33(8): 1315-1324 |
| |
| 作者姓名： | 廖成水 王晓利 田文静 张梦珂 张春杰 李银聚 吴庭才 程相朝 |
| |
| 作者单位： | 1 河南科技大学 动物科技学院 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，河南 洛阳 471023,2 河南科技大学 医学院，河南 洛阳 471023,1 河南科技大学 动物科技学院 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，河南 洛阳 471023,1 河南科技大学 动物科技学院 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，河南 洛阳 471023,1 河南科技大学 动物科技学院 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，河南 洛阳 471023,1 河南科技大学 动物科技学院 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，河南 洛阳 471023,1 河南科技大学 动物科技学院 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，河南 洛阳 471023,1 河南科技大学 动物科技学院 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室，河南 洛阳 471023; 3 洛阳职业技术学院，河南 洛阳 471099 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31572489)，河南省科技攻关项目 (No. 152102110078)，河南省高等学校重点科研项目计划 (No. 17A230009)，河南科技大学博士启动基金项目 (No. 13480071) 资助。 |
| |
| 摘 要： | 旋毛虫plancitoxin-1-like(Ts-Pt)是旋毛虫125种DNaseⅡ家族蛋白中唯一具有典型DNaseⅡ活性区域HKD基序的核酸酶,且普遍认为,组氨酸位点是DNaseⅡ的活性氨基酸位点。为研究Ts-Pt活性位点突变体蛋白的核酸酶活性,利用重叠PCR方法获得Ts-Pt活性位点突变体片段,以p ET-28a(+)为载体构建重组表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达。重组Ts-Pt突变体蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE分析。利用琼脂糖凝胶电泳法和核酸酶酶谱分析重组Ts-Pt突变体蛋白的核酸酶活性。成功构建含Ts-Pt突变体重组质粒的基因工程菌,SDS-PAGE和亲和层析纯化结果显示,重组Ts-Pt突变体蛋白呈包涵体表达。重组蛋白经复性后并没有表现出核酸酶活性,但核酸酶酶谱分析结果显示,包涵体表达的重组Ts-Pt突变体蛋白表现出降解DNA的能力。同时,N端和C端活性位点H及HCK和DHSK突变并不影响Ts-Pt的核酸酶活性,研究结果为进一步研究庞大的DNaseⅡ家族蛋白在旋毛虫发育和感染方面的作用提供一定的参考。
|
| 关 键 词： | 旋毛虫，plancitoxin-1-like，活性位点，突变体，核酸酶 |
| 收稿时间： | 2017-01-10 |
Nuclease activity of the recombinant plancitoxin-1-like proteins with mutations in the active site from Trichinella spiralis |
| |
| Chengshui Liao,Xiaoli Wang,Wenjing Tian,Mengke Zhang,Chunjie Zhang,Yinju Li,Tingcai Wu and Xiangchao Cheng. Nuclease activity of the recombinant plancitoxin-1-like proteins with mutations in the active site from Trichinella spiralis[J]. Chinese journal of biotechnology, 2017, 33(8): 1315-1324 |
| |
| Authors: | Chengshui Liao Xiaoli Wang Wenjing Tian Mengke Zhang Chunjie Zhang Yinju Li Tingcai Wu Xiangchao Cheng |
| |
| Affiliation: | 1 Luoyang Key Laboratory of Live Carrier Biomaterial and Animal Disease Prevention and Control, College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China,2 Medical College, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China,1 Luoyang Key Laboratory of Live Carrier Biomaterial and Animal Disease Prevention and Control, College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China,1 Luoyang Key Laboratory of Live Carrier Biomaterial and Animal Disease Prevention and Control, College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China,1 Luoyang Key Laboratory of Live Carrier Biomaterial and Animal Disease Prevention and Control, College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China,1 Luoyang Key Laboratory of Live Carrier Biomaterial and Animal Disease Prevention and Control, College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China,1 Luoyang Key Laboratory of Live Carrier Biomaterial and Animal Disease Prevention and Control, College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China and 1 Luoyang Key Laboratory of Live Carrier Biomaterial and Animal Disease Prevention and Control, College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China; 3 Luoyang Vocational and Technical College, Luoyang 471099, Henan, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Trichinella spiralis plancitoxin-1-like active site mutation nuclease |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《生物工程学报》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《生物工程学报》下载全文 |
|
