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梨自交不亲和基因cDNA芯片杂交条件优化及应用北大核心
引用本文:谭慧,谭晓风,江南,邓靖,王楚正.梨自交不亲和基因cDNA芯片杂交条件优化及应用北大核心[J].生物技术,2017(1):58-64.
作者姓名:谭慧  谭晓风  江南  邓靖  王楚正
作者单位:1.中南林业科技大学经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室/经济林育种与栽培国家林业局重点实验室410004;2.湖南工业大学包装与材料工程学院/生命科学与化学学院412007;
基金项目:国家自然科学基金项目("基于基因芯片技术的砂梨品种S基因型鉴定及S基因资源挖掘与进化分析";No.31272124)
摘    要:目的]优化梨自交不亲和基因(S-RNase或S基因)c DNA芯片杂交条件,利用芯片检测梨品种S基因型。方法]提取梨品种雌蕊RNA,Cy3标记引物RT-PCR获得S基因荧光标记特异c DNA序列。设置不同杂交条件,用已知S基因型品种荧光标记的PCR产物在不同条件下分别与芯片杂交,杂交信号分析芯片杂交效果。用芯片优化杂交体系鉴定梨品种未知S基因型,DNA测序验证芯片鉴定结果。结果]芯片杂交最佳条件:杂交温度42℃,杂交时间8~9 h,PCR纯化产物终浓度为200 ng·μl-1。优化杂交条件下芯片鉴定晚咸丰、秀水、丽江马占梨1、湘菊、木通梨、甘甜、弥渡小红梨、丽江大中古、金晶和弥渡火把等梨品种S基因型分别为:Pp S15Pp S52、Pp S4Pp S5、Pb S22Pp S37、Pp S1Pp S2、Pp S1Pp S3、Pp S13Pp S15、Pp S12Pb S42、Pb S21Pb S22、Pp S3Pp S60和Pp S5Pp S5。DNA测序验证各品种所含S基因与芯片鉴定结果一致。结论]梨自交不亲和基因c DNA芯片优化杂交条件后可准确鉴定梨品种所含已鉴定的S基因资源。

关 键 词:  cDNA芯片  S-RNase基因  杂交  S基因型
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