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| 抗整合素β3胞外区噬菌体抗体库的构建及筛选 | |
| 作者姓名： | 杨俊涛 李正强 王清明 陈吉中 范国才 陈惠鹏 |
| 作者单位： | 1. 军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850;吉林大学,分子酶学教育部重点实验室,长春,130023 2. 吉林大学,分子酶学教育部重点实验室,长春,130023 3. 军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850 4. 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071 |
| 摘 要： | 用RT-PCR的方法从人胶质瘤BT-325细胞中扩增人整合素β3胞外区,并克隆到载体pET-24a中构建表达载体.表达的人整合素β3胞外区经变性、复性和纯化后免疫BALB/c小鼠,提取脾脏总RNA,用RT-PCR技术扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,经重叠PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接成单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,电转化至大肠杆菌TGl,经辅助噬菌体M13KO7超感染,构建噬菌体单链抗体库.通过淘选从该抗体库中筛选特异性识别人整合素β3胞外区的噬菌体单链抗体.结果表明,成功构建了库容为2.6×106的抗人整合素β3胞外区的单链抗体库,初步筛选到了与人整合素β3胞外区特异性结合的单链抗体. |
| 关 键 词： | 整合素β3 单链抗体 胞外区 噬菌体抗体库 扩增 胶质瘤 ET 电转化 重叠PCR 特异性识别 |
| 文章编号： | 1009-0002(2004)06-0552-05 |
| 修稿时间： | 2004-05-20 |
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