| 利用CRISPR/Cas9技术产生肌肉特异表达Cas9的小鼠胚胎 |
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| 引用本文： | 李昊,陈胜男,李松美,朴善花,安铁洙,王春生.利用CRISPR/Cas9技术产生肌肉特异表达Cas9的小鼠胚胎[J].中国实验动物学报,2019(3):271-277. |
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| 作者姓名： | 李昊 陈胜男 李松美 朴善花 安铁洙 王春生 |
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| 作者单位： | 东北林业大学生命科学学院动物发育研究室 |
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| 基金项目： | 中央高校基本科研业务费专项C类项目资金资助(2572016CA10);黑龙江省自然科学基金项目(C2016012)~~ |
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| 摘 要： | 目的通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9小鼠动物模型奠定基础。方法设计小鼠Rosa26位点sgRNA并通过体外酶切验证活性,同时使用同源重组构建肌肉特异性同源打靶载体;通过显微注射将Rosa26sgRNA与Cas9蛋白注射到小鼠胚胎,通过PCR及测序检测胚胎的编辑情况,同时移植到假孕母鼠体内,待其生产;将同源打靶载体与Rosa26sgRNA和Cas9一起注射到小鼠胚胎,通过PCR检测整合情况。结果体外酶切实验表明,体外转录的sgRNA与Cas9蛋白联合可对靶位点产生编辑作用;成功构建了肌肉特异性同源打靶载体Donor-SP-px459;通过原核注射获得Rosa26基因编辑胚胎,经移植获得Rosa26基因编辑小鼠;注射同源打靶载体后,成功获得肌肉特异表达Cas9蛋白的基因打靶小鼠胚胎。结论利用CRISPR/Cas9技术,成功获得Rosa26基因编辑胚胎和小鼠,并获得了肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为利用基因打靶构建肌肉特异表达Cas9的小鼠动物模型奠定基础。
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| 关 键 词： | Rosa26 Cas9 基因编辑 肌肉特异 基因打靶 |
Generation of muscle-specific gene-targeted mouse embryos expressing Cas9 protein |
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| LI Hao,CHEN Shengnan,Li Songmei,PIAO Shanhua,AN Tiezhu,WANG Chunsheng.Generation of muscle-specific gene-targeted mouse embryos expressing Cas9 protein[J].Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica,2019(3):271-277. |
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| Authors: | LI Hao CHEN Shengnan Li Songmei PIAO Shanhua AN Tiezhu WANG Chunsheng |
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| Institution: | (Laboratory of Developmental Biology,College of Life Science,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China) |
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| Abstract: | LI Hao;CHEN Shengnan;Li Songmei;PIAO Shanhua;AN Tiezhu;WANG Chunsheng(Laboratory of Developmental Biology,College of Life Science,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China) |
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| Keywords: | Rosa26 Cas9 gene editing muscle-specific gene targeting |
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