| H3N2亚型猪流感病毒的拯救及HA与NA基因的替换 |
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| 引用本文： | 杜金玲,刘明,刘春国,杨涛,李洪涛. H3N2亚型猪流感病毒的拯救及HA与NA基因的替换[J]. 微生物学报, 2009, 49(6): 813-819 |
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| 作者姓名： | 杜金玲 刘明 刘春国 杨涛 李洪涛 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,农业部动物流感重点开放实验室,哈尔滨,150001 |
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| 基金项目： | 国家“十一五”科技支撑计划资助项目(2006BAD06A05)； 黑龙江省自然科学基金项目(ZJN0702-02) |
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| 摘 要： | 摘要：【目的】为研究流感病毒突破种间屏障分子机制，筛选流感基因工程疫苗株。【方法】本实验以猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)为亲本株，利用反向遗传学操作技术，采用RT-PCR技术对该病毒的8个基因片段分段进行扩增，通过与双向转录载体pHW2000连接， 重组质粒转染293T和MDCK共培养细胞，拯救出全部基因均来自于亲本株的猪流感病毒rgH3N2，并分别以人流感病毒A/ PR/8/34(H1N1)、禽流感病毒A/Duck/Nanchang /4-165/2000 (H4N6 )、马流感病毒A/Equine/Fuyun/2008/(H3N8)的HA和NA基因替换A/Swine/Henan/S4/01的相应基因，【结果】生物学实验结果表明rgH3N2在鸡胚半数感染量、组织培养半数感染量、稳定性试验等方面都与亲本株保持一致。rgH3N2经鸡胚多次传代后血凝价最高可达到1:256，接种MDCK细胞60 h后，血凝价可以达到1:64。基因替换后成功拯救出的重组病毒rgH1N1、rgH4N6和rgH3N8在鸡胚和细胞上均具有较高的增殖能力。【结论】病毒的成功拯救为流感病毒突破种间屏障分子机制，HA、NA基因在流感病毒跨种属传播中所扮演角色的研究和流感基因工程疫苗株的筛选奠定了基础。
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| 关 键 词： | 关键词：猪流感；反向遗传；RT-PCR；H3N2亚型；病毒拯救 |
| 收稿时间： | 2009-02-05 |
| 修稿时间： | 2009-03-31 |
Rescue of H3N2 subtype swine influenza virus and substitution of Hemagglutinin, Neuraminidase |
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| Jinling Du,Ming Liu,Chunguo Liu,Tao Yang and Hongtao Li. Rescue of H3N2 subtype swine influenza virus and substitution of Hemagglutinin, Neuraminidase[J]. Acta microbiologica Sinica, 2009, 49(6): 813-819 |
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| Authors: | Jinling Du Ming Liu Chunguo Liu Tao Yang Hongtao Li |
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