| 携带反义凝血酶受体和p21双基因共表达腺病毒伴随病毒载体的构建与包装 |
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| 引用本文： | 孟宪敏,吴小兵,米立国,伍志坚,赵秀文,刘冬青,丁金凤.携带反义凝血酶受体和p21双基因共表达腺病毒伴随病毒载体的构建与包装[J].生物化学与生物物理进展,2002,29(4):597-603. |
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| 作者姓名： | 孟宪敏 吴小兵 米立国 伍志坚 赵秀文 刘冬青 丁金凤 |
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| 作者单位： | 1. 中国医学科学院,中国协和医科大学,阜外心血管病医院分子医学中心,北京,100037
2. 中国预防医学科学院病毒学研究所,基因工程国家重点实验室,北京,100052 |
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| 基金项目： | 国家“九五”攻关项目(96-906-02-07)，国家自然科学基金资助项目(39970297)，国家“863”基因治疗重大课题(863-BH03-05-02). |
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| 摘 要： | 为探讨双基因共表达对再狭窄的防治作用，分别构建了含反义凝血酶受体(ATR)或/和p21单、双基因及报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒伴随病毒(AAV)载体.上述载体经脂质体介导转染BHK-21细胞, G418筛选获得整合有外源基因的细胞株.克隆形成过程中显示单、双基因转染后细胞增殖受到了不同程度的抑制，克隆形成速度减慢，细胞形态改变，且双基因的作用明显大于单基因.以绿色荧光出现说明报告基因得到表达后，又以DNA印迹证实ATR和p21单、双基因已整合于细胞基因组中，并维持了凝血酶受体(TR)基因的反义位置.半定量RT-PCR证实TR基因表达降低，p21基因表达升高，ATR和p21(AP)双基因得到了共表达.以具有可提供复制和包装功能的重组单纯疱疹病毒rHSV-rc/ΔU12分别感染载有不同基因的BHK细胞株，包装产生重组AAV(rAAV)病毒, 并经点杂交法测定其滴度(每毫升病毒液中所含病毒颗粒数).rAAV/AP中ATR与p21的病毒颗粒数分别为1.02×1013/ml和1.08×1013/ml, 单基因rAAV/ATR的滴度为6.54×1012/ml，rAAV/P21为1.06×1013/ml，为进一步的体内外实验奠定了物质基础.
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| 关 键 词： | 反义凝血酶受体基因 p21基因 腺病毒伴随病毒载体 病毒滴度 再狭窄 |
| 收稿时间： | 2001/12/7 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2001年12月7日 |
Construction and Package of Antisense Thrombin Receptor and p21 Co-expression Adeno-associated Virus Vector |
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| MENG Xian-Min,WU Xiao-Bing,MI Li-Guo,WU Zhi-Jian,ZHAO Xiu-Wen,LIU Dong-Qing and DING Jin-Feng.Construction and Package of Antisense Thrombin Receptor and p21 Co-expression Adeno-associated Virus Vector[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2002,29(4):597-603. |
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| Authors: | MENG Xian-Min WU Xiao-Bing MI Li-Guo WU Zhi-Jian ZHAO Xiu-Wen LIU Dong-Qing and DING Jin-Feng |
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| Institution: | Cardiovascular Institute and Fuwai Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100037, China;State Key Laboratory for Molecular Virology and Genetic Engineering, Institute of Virology, Chinese Academy of Preventive Medicine, Beijing 100052, China;Cardiovascular Institute and Fuwai Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100037, China;State Key Laboratory for Molecular Virology and Genetic Engineering, Institute of Virology, Chinese Academy of Preventive Medicine, Beijing 100052, China;Cardiovascular Institute and Fuwai Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100037, China;Cardiovascular Institute and Fuwai Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100037, China;Cardiovascular Institute and Fuwai Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100037, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | antisense thrombin receptor gene p21 gene adeno-associated virus vector virus titre restenosis |
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