凝乳酶β-转角突变体的构建、表达和性质分析

为了阐明牛凝乳酶的第二个发夹结构中的Ⅵ型β-转角的功能，利用基因突变技术，将该转角的氨基酸残基(Leu20-Gly21-The22-Pro23-Pro24-Gln25)改为(Leu20-Gly-Gly-Gln25)、(Leu20SerGlyGln25)或(Leu20GlySerGln25),得到3个突变牛凝乳酶原表达质粒Pmcgg,Pmcsg和Pmcgs。除Pmcgs不能在大肠杆菌中表达外，Pmcgg和Pmcsg均能以包含体的形式进行表达，且表达水平与野生型相当。像野生型凝乳酶原一样，Pmcgg和Pmcsg的表达产物经过变性复性，均能自活化为假凝乳酶，而且复性后的酶原突变体在DEAESepharose CL6B上的柱行为与野生型相类似，但突变体假凝乳酶的凝乳及水解酪蛋白活性均明显低于野生型。说明突变对酶原的折叠影响较小，但对酶的催化效率影响较大。