整合素αMβ2 I-结构域的基因合成和蛋白表达

目的：利用大肠杆菌表达系统表达整合素αMβ2 I-结构域，并对其进行纯化。方法与结果：利用DNAWorks在线引物程序设计经过密码子优化的整合素αMβ2 I-结构域的寡核苷酸序列；采用PCR介导的基因拼装法合成αMβ2 I-结构域DNA模板，将其克隆至原核表达载体pET11d-6h上，并转化大肠杆菌，获得表达菌株；经IPTG诱导，αMβ2 I-结构域在大肠杆菌BL21（DE3）中获得高效表达，表达产物经Ni-NTA琼脂糖层析柱纯化后，纯度达到90％以上；电喷雾电离质谱测定表明纯化所得的蛋白精确的相对分子质量为23720.0，与预期值相符；肽指纹质谱图谱鉴定其为目的蛋白。结论：αMβ2 I-结构域的高效表达，为进一步研究其与配体的结合及其复合物晶体结构奠定了基础。