MORF4L1蛋白抗体制备及生物信息学分析

目的]构建MORF4L1原核表达载体和纯化表达产物，制备MORF4L1蛋白抗体并进行生物信息学分析。方法]利用PCR将MORF4L1基因片段酶切、克隆、转化至大肠杆菌Bl21(DE3),经IPTG诱导表达蛋白。利用His-Tag技术纯化重组蛋白，用重组蛋白免疫新西兰白兔，采集抗血清后通过硫酸铵沉淀法将多克隆抗体从抗血清中纯化，应用Western Blotting验证多克隆抗体与内外源性MORF4L1蛋白的结合特异性。利用在线软件(GEPIA、UALCAN)进行生物信息学分析。结果]成功构建了重组蛋白，蛋白纯化后在相对分子质量(Mr)43000位置处有单一条带，重组His-MORF4L1蛋白与His抗体发生特异性结合。制备的抗血清与MORF4L1蛋白特异性结合，纯化后仅在相对分子质量(Mr)55000和25000位置处有条带。纯化的多克隆抗体与内外源性MORF4L1蛋白发生特异性反应。MORF4L1的表达与肝癌不良预后相关。结论]成功构建MORF4L1蛋白及抗体，MORF4L1在肝癌中高表达预后差，对进一步研究MORF4L1蛋白的结构和生物学功能具有重要意义。