非同位素PCR-SSCP方法的初步临床应用 |
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作者姓名: | 毛新 黄明生 牟庶华 杨光华 曾仲 赵坡 |
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作者单位: | 华西医科大学精神科遗传室,华西医科大学病理科,成都市第三人民医院神经内科,军事医学科学院放射医学研究所 |
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基金项目: | 国家自然科学基金,国家教委博士学科点专顶科研基金 |
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摘 要: | 单链构象多态性检测法(PCR-SSCP)是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而,在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物,从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的PCR-SSCP方法,该方法不用同位素标记引物,而直接在溴乙啶染色的聚丙烯酰胺凝胶上显示SSCP。用该方法对55例平滑肌肉瘤p53基因第7外显子突变的检测表明,38%的瘤组织DNA存在异常的SSCP。其中10例有HaeⅢ和MspI酶切位点的突变(18%),19例有突变型p53蛋白的过度表达(9例同时有异常SSCP改变)。而p53质粒DNA,平滑肌瘤及Alzheimer病患者基因组DNA无p53基因第7外显子扩增片段的异常SSCP改变。同时,还使用该方法对临床诊断的20例Alzheimer病患者和8例健康对照进行了β-淀粉样蛋白前体基因第16和17外显子的扩增及分析,均未发现有异常SSCP改变及EcoRI,BclI酶切位点的突变。本研究结果提示,该非同位素PCR-SSCP方法可靠、敏感、简便、快速,具有潜在的推广价值。
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关 键 词: | 非同位素,PCR-SSCP,平滑肌肉瘤,Alzheimer病 |
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