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SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响
引用本文:Li SP,Feng JJ,Wang HG,Wang XF,Lv ZJ. SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响[J]. 遗传, 2012, 34(1): 113-119
作者姓名:Li SP  Feng JJ  Wang HG  Wang XF  Lv ZJ
作者单位:河北医科大学实验动物学部遗传研究室河北省实验动物重点实验室;河北省邢台市人民医院检验二科;华东精神卫生康复中心;河南大学医学院生物化学与分子生物学教研室
基金项目:河北省自然科学基金项目(编号:C2008001065和C2011206043)资助
摘    要:SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA,简称PolyA)序列是有转录终止作用和使转录的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp),含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信号(Polyadenylation signal)。在pEGFP-C1质粒的GFP基因下游插入14个同向串联的Alu序列(Alu14),构建pAlu14质粒,瞬时转染HeLa细胞,用Northern blot检测和荧光显微镜观察GFP RNA和GFP蛋白表达,发现Alu串联序列强烈抑制GFP基因表达,该序列没有转录终止作用产生高分子量GFP融合RNA。又在pAlu14质粒GFP基因和Alu串联序列之间按正、反方向插入PolyA序列及去除AATAAA信号的PolyA序列,插入的这些PolyA序列均能部分解除Alu14对GFP基因的抑制作用;去除AATAAA信号的PolyA正、反序列仍然引起转录终止。将PolyA反序(PolyAas)分为4段每段60 bp,中间的2段分别称为2F2R和3F3R,将2F2R或3F3R插在pAlu14质粒的Alu串联序列的上游,随着插入2F2R片段拷贝数的增加转录的GFP融合RNA的分子量增加;2F2R的下游如果依然是2F2R那么2F2R可以支持转录延伸,如果2F2R下游是Alu串联序列则2F2R导致转录终止。无论插入一个3F3R或插入64个3F3R,均产生低分子量GFP RNA。

关 键 词:Alu  SV40 PolyA  AATAAA信号  GFP  转录终止

The effects of SV40 PolyA sequence and its AATAAA signal on upstream GFP gene expression and transcription termination
Li Shu-Ping,Feng Jing-Jing,Wang Hong-Gang,Wang Xiu-Fang,Lv Zhan-Jun. The effects of SV40 PolyA sequence and its AATAAA signal on upstream GFP gene expression and transcription termination[J]. Hereditas, 2012, 34(1): 113-119
Authors:Li Shu-Ping  Feng Jing-Jing  Wang Hong-Gang  Wang Xiu-Fang  Lv Zhan-Jun
Affiliation:Department of Genetics, Hebei Medical University, Shijiazhuang, China. lilishuping01@163.com
Abstract:
Keywords:
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