| 松江湿地沉积物细菌T-RFLP分析中PCR体系的建立与优化 |
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| 引用本文： | 李莹,臧淑英,马大龙,鄂立思.松江湿地沉积物细菌T-RFLP分析中PCR体系的建立与优化[J].生命科学研究,2014(4):327-331. |
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| 作者姓名： | 李莹 臧淑英 马大龙 鄂立思 |
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| 作者单位： | 哈尔滨师范大学黑龙江省普通高等学校地理环境遥感监测重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点资助项目(41030743);黑龙江省高等学校科技创新团队建设计划项目(2010td10);哈尔滨市科技局项目(2013RFQXJ040) |
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| 摘 要： | 细菌是微生物的重要组成部分,其对保持湿地生态系统平衡起着重要作用,在沉积物细菌T-RFLP(terminal restriction fragment length polymorphism)分析中建立与优化PCR体系对进一步研究沉积物细菌群落组成具有重要意义。此次研究以松江湿地沉积物细菌基因组DNA为模板,采用正交和单因素试验对PCR体系中各因素(模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶)进行优化,系统分析各因素对PCR扩增结果的影响,建立最佳PCR反应体系。在20μL反应体系中,DNA模板30 ng、Mg2+2.0 mmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、引物0.2μmol/L、Taq酶0.5 U。该优化体系确保了沉积物细菌T-RFLP分析过程中PCR产物的质量与效果。
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| 关 键 词： | 细菌 体系优化 末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)分析 PCR体系 |
Songjiang Wetland Sediment Bacteria Established in the T-RFLP Analysis and Optimization of PCR System |
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