发根农杆菌介导几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因转化烟草的研究

用冻融法和三亲交配法将具有几丁质酶基因、β—1，3—葡聚糖酶基因和卡那霉素抗性标记基因的质牲pBLGC导入具有Ri质粒的发根农杆菌中。用叶盘法转化烟草的三个品种，经Kan抗性筛选获得126株再生植株，对119株再生植株分别以启动子CaMV35S、几丁质酶基因和β—1，3—葡聚糖酶基因的引物进行PCR检测，其中几丁质酶基因至阳性的植株有72株，β—1，3—葡聚糖酶基因至阳性的有47株，具有几丁质酶基因和β—1，3—葡聚糖酶基因的植株有36株。对转化的24株转基因经PCR-Southern杂交，结果均至阳性。实验结果表明，外源基因的转化频率与植物品种、外源基因片段的大小有关，几丁质酶基因和β—1，3—葡聚糖酶基因分别或共同整合到植物基因组中。