| 弓形虫表面抗原SAG1截短型片段在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化 |
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| 引用本文： | 安立刚,蒋蔚,王权,陈永军,龚国华,周锦萍,邢小勇,孙泉云,丁铲. 弓形虫表面抗原SAG1截短型片段在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化[J]. 生物技术通报, 2009, 0(10) |
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| 作者姓名： | 安立刚 蒋蔚 王权 陈永军 龚国华 周锦萍 邢小勇 孙泉云 丁铲 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院上海兽医研究所,农业部寄生虫学重点开放实验室,上海,200241
2. 上海市动物疫病防控中心,上海,201103 |
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| 基金项目： | 公益性行业(农业)科研专项经费项目，上海市科技兴农重点攻关项目 |
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| 摘 要： | 在大肠杆菌中高效表达及纯化获得可溶性、有反应活性的弓形虫表面抗原SAG1截短型片段(tSAG1),为研制新型的弓形虫病检测试剂奠定基础.构建重组质粒pET-32a-tSAG1并将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达蛋白.SDS-PAGE分析表达产物的表达形式,通过降低培养温度、降低摇床转数和升高LB液体培养基pH,诱导目的蛋白在上清中表达,利用His·Bind(R) Kit试剂盒对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA检测纯化蛋白的反应原性.在IPTG为1 mmol/L、温度37℃条件下,tSAG1以融合蛋白(His-tSAG1)的形式在大肠埃希菌中高效表达,表达产物以包涵体形式存在.在22℃和LB培养基pH为7.7条件下,融合蛋白主要在上清中表达.Western blot和ELISA分析纯化蛋白能被弓形虫的阳性血清所识别.tSAG1在大肠埃希菌中得到了可溶性蛋白表达,经纯化后能被弓形虫的阳性血清所识别,可用于制备检测弓形虫病的诊断试剂.
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| 关 键 词： | 弓形虫 蛋白表达 蛋白纯化 免疫印迹 |
Expression and Purification of Soluble Fusion Protein of Toxoplasma gondii Tsag1 in Escherichia coli |
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| An Ligang,Jiang Wei,Wang Quan,Chen Yongjun,Gong Guohua,Zhou Jinping,Xing Xiaoyong,Sun Quanyun,Ding Chan. Expression and Purification of Soluble Fusion Protein of Toxoplasma gondii Tsag1 in Escherichia coli[J]. Biotechnology Bulletin, 2009, 0(10) |
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| Authors: | An Ligang Jiang Wei Wang Quan Chen Yongjun Gong Guohua Zhou Jinping Xing Xiaoyong Sun Quanyun Ding Chan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | tSAG1 ELISA |
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