| 玉米尿卟啉原Ⅲ脱羧酶同功酶生物信息学分析、基因克隆和原核表达 |
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| 引用本文： | 汪苗,方美姑,亓振国,张宽亮,程备久,范军. 玉米尿卟啉原Ⅲ脱羧酶同功酶生物信息学分析、基因克隆和原核表达[J]. 基因组学与应用生物学, 2010, 29(4). DOI: 10.3969/gab.029.000619 |
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| 作者姓名： | 汪苗 方美姑 亓振国 张宽亮 程备久 范军 |
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| 作者单位： | 安徽省作物生物学重点实验室,安徽农业大学生命科学学院,合肥,230036 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，安徽省攻关课题 |
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| 摘 要： | 尿卟啉原Ⅲ脱羧酶是生物卟啉类化合物分支合成的关键酶。从GenBank中搜寻到4种玉米尿卟啉原Ⅲ脱羧酶:Les22、UROD1、UROD2和截短UROD,氨基酸序列比对显示N端的同源性较差;玉米les22基因比urod1基因在开放阅读框的上游少3个碱基,导致阅读框移码。植物除玉米外存在高度同源的UROD1和UROD2,具有结构完整性。本文以玉米幼叶总RNA为模板,通过RT-PCR克隆了玉米les22和urod2基因,并对突变位点进行校正,同时通过定点突变获得urod1基因,它们都编码去除叶绿体导肽的尿卟啉原Ⅲ脱羧酶。再分别将les22、urod2和urod1基因插入大肠杆菌的不同表达载体,转化表达菌株BL21(DE3),16℃诱导表达18h,SDS-PAGE分析显示,Les22的N端含有组氨酸标签或SUMO蛋白,重组蛋白表达为包涵体,UROD2的N端含有组氨酸标签或SUMO、TRX、GST或MBP蛋白,未检测到目的蛋白在上清液的特异表达,而UROD1和MBP融合为可溶性表达,表明玉米UROD的N端氨基酸残基可能参与蛋白在大肠杆菌的折叠。这为研究玉米UROD的种类和功能奠定基础。
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| 关 键 词： | 尿卟啉原Ⅲ脱羧酶 玉米 基因克隆 原核表达 生物信息学分析 |
Bioinformatics Analysis, Gene Cloning and Prokaryotic Expression of Uroporphyrinogen Decarboxylase Isozymes from Maize (Zea mays) |
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| Wang Miao,Fang Meigu,Qi Zhenguo,Zhang Kuanliang,Cheng Beijiu,Fan Jun. Bioinformatics Analysis, Gene Cloning and Prokaryotic Expression of Uroporphyrinogen Decarboxylase Isozymes from Maize (Zea mays)[J]. Genomics and Applied Biology, 2010, 29(4). DOI: 10.3969/gab.029.000619 |
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| Authors: | Wang Miao Fang Meigu Qi Zhenguo Zhang Kuanliang Cheng Beijiu Fan Jun |
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