含MPN结构域蛋白(MPND)通过上调乙型肝炎病毒X蛋白水平影响其功能 |
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作者姓名: | 张翼 吴琼 施佳健 张璐 林旭 陈婉南 |
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作者单位: | 1. 福建医科大学消化道恶性肿瘤教育部重点实验室;2. 福建省肿瘤微生物学重点实验室;3. 福建医科大学基础医学院病原生物学系 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(项目号:81672031),题目:BRG1相关因子155对乙型肝炎病毒X蛋白翻译后水平的调控及意义;;福建省自然科学基金项目(项目号:2019J01299),题目:乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白HBDSP通过诱导上皮间质转化促进肝癌细胞侵袭转移机制研究; |
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摘 要: | 乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)在生成后即被快速降解,但目前影响HBx稳定性的机制仍未完全阐明。课题组前期通过酵母双杂交筛选与HBx具有相互作用的去泛素化酶(Deubiqutinases,DUBs),含MPN结构域蛋白(MPN domain containing protein,MPND)为筛选获得的蛋白之一。本研究首先采用免疫共沉淀和激光共聚焦实验验证HBx与MPND的相互作用,并通过酵母双杂交实验进一步分析两者相互作用的区域。Western blot检测过表达MPND的肝癌细胞中HBx蛋白水平的变化。以蛋白合成抑制剂环己酮亚胺(Cycloheximide,CHX)或蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞,检测MPND对HBx蛋白半衰期及降解途径的影响。通过泛素化实验分析MPND对HBx泛素化水平的影响。采用双荧光素酶报告基因检测实验和克隆形成实验检测MPND对HBx生物学功能的影响。结果显示,MPND与HBx在肝癌细胞内存在相互作用,且HBx的26~50和81~120位氨基酸与MPND的272~362位氨基酸介导HBx与MPND的结合;...
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关 键 词: | 乙型肝炎病毒X蛋白 去泛素化酶 蛋白酶体 蛋白降解 |
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