大鼠海马神经细胞VDAC1基因shRNA慢病毒表达载体的构建及干扰效果评价

目的:构建线粒体电压依赖性阴离子通道(VDAC1)短发卡样RNA重组慢病毒(LV)载体，沉默海马神经细胞VDAC1基因表达，观察所构建的慢病毒载体对海马神经细胞的干扰效果。方法:根据基因库提供的大鼠VDAC1基因的核苷酸序列(序列号为：AB039662.1),设计合成3条LV3-VDAC1-shRNA及1条无义的阴性表达载体；将构建好的慢病毒载体转染到海马神经细胞，按照不同的转染条件对细胞分为空载组、对照(NC)组、病毒组，分别在病毒感染复数(MOI)值在100和10的条件下进行转染；采用荧光定量PCR和Western blot的方法分别检测VDAC1基因在mRNA水平和蛋白水平的表达。结果:与空载组相比，慢病毒感染组的扩增倍数均大于1,VDAC1基因在mRNA水平与蛋白水平表达均明显升高(P<0.05);与对照组相比，病毒感染复数(MOI)=10与MOI=100之间没有显著差异(P>0.05);PCR结果与Western blot结果综合来看，VDAC1转录水平表达越高，蛋白水平表达越低，呈现反向关联的状态。结论:三种慢病毒对海马神经细胞都有干扰效果，VDAC1基因的mR...