| 人IL-6基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化 |
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| 引用本文： | 史继静,刘朝奇,杨凡,杨祖伟. 人IL-6基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化[J]. 生物技术通报, 2010, 0(5) |
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| 作者姓名： | 史继静 刘朝奇 杨凡 杨祖伟 |
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| 作者单位： | 三峡大学分子生物学研究所,宜昌,443002 |
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| 摘 要： | 构建人白细胞介素6(IL-6)的原核表达载体并优化其表达条件,为IL-6的高效表达提供试验依据。以人T细胞cDNA为模板通过PCR方法扩增IL-6基因,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,产物用Western blotting及人IL-6检测试剂盒分析鉴定。在保持菌种不改变的前提下,分别改变IPTG的浓度、培养时间、卡那霉素浓度、培养温度等来优化IL-6表达条件。结果显示,原核表达载体pET28 a(+)-IL-6成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约22 kD的IL-6蛋白,经Western blotting鉴定正确,经人IL-6试剂盒检测显示具有较高的免疫活性。在IPTG浓度400μmol/mL,卡那霉素浓度50μg/mL,40℃培养6 h的条件下,目的蛋白表达量最高,可占总蛋白表达量的40%。成功构建人IL-6原核表达载体且获高效表达,为研究IL-6生物学活性及产品开发提供了试验基础。
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| 关 键 词： | 原核表达 条件优化 |
Cloning of Human Interleukin-6 Gene and the Optimized Expression Condition in Prokaryotes |
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| Shi Jijing,Liu Zhaoqi,Yang Fan,Yang Zuwei. Cloning of Human Interleukin-6 Gene and the Optimized Expression Condition in Prokaryotes[J]. Biotechnology Bulletin, 2010, 0(5) |
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| Authors: | Shi Jijing Liu Zhaoqi Yang Fan Yang Zuwei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | IL-6 |
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