粪便宏基因组来源低分子量碱性β-半乳糖苷酶的异源表达及酶学性质 |
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作者姓名: | 范琴 曾璐瑶 杨金茹 韩楠玉 杨云娟 黄遵锡 吴倩 许波 |
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作者单位: | 云南师范大学生命科学学院,云南 昆明 650500;云南师范大学生命科学学院,云南 昆明 650500;生物能源持续开发利用教育部工程研究中心,云南 昆明 650500;云南省生物质能与环境生物技术重点实验室,云南 昆明 650500 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(31860299);国家重点研发计划(2017YFB0308400) |
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摘 要: | 【背景】β-半乳糖苷酶在食品加工、临床医疗及基因工程等领域有重要的应用价值,开发酶活性高、热稳定性强的β-半乳糖苷酶已成为研究热点。【目的】从西黑冠长臂猿(Nomascus concolor)粪便微生物宏基因组中挖掘新型β-半乳糖苷酶并进行酶学性质研究。【方法】以西黑冠长臂猿粪便微生物宏基因组DNA为模板扩增β-半乳糖苷酶基因GalNC1-8,构建重组表达质粒pEASY-E2/GalNC1-8,转化至大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)异源表达,研究其酶学性质。【结果】获得GH35家族碱性β-半乳糖苷酶GalNC1-8,其分子量为28.18 kDa,最适温度为50°C,最适pH为8.0。将该酶在30-50°C下处理1 h,剩余酶活仍保持在80%以上;pH 7.0-9.0下处理1 h,剩余酶活大于54%。在含乙醇的反应体系中,其酶活性几乎不受影响;β-巯基乙醇、丙三醇、甲醇、Na+、K+和Li+对其酶活性有促进作用。在0.5-3.5 mol/L NaCl下处理1 h后,仍保留50%以上的酶活性。...
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关 键 词: | β-半乳糖苷酶 粪便微生物 宏基因组 酶学性质 |
收稿时间: | 2021-06-07 |
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