| 具潮霉素B抗性的NIH3T3细胞饲养层的制备 |
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| 引用本文： | 张梅英,李华,董婉维,杨葳,秦英,汪瑛,周生来,于洋,王惟,王太一,王禄增. 具潮霉素B抗性的NIH3T3细胞饲养层的制备[J]. 中国实验动物学报, 2005, 0(Z1) |
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| 作者姓名： | 张梅英 李华 董婉维 杨葳 秦英 汪瑛 周生来 于洋 王惟 王太一 王禄增 |
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| 作者单位： | 中国医科大学实验动物部 沈阳110001(张梅英，李华，董婉维，杨葳，秦英，汪瑛，周生来，于洋，王惟，王太一)，中国医科大学实验动物部 沈阳110001(王禄增) |
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| 摘 要： | [目的]建立具有潮霉素B(hygromycinB)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2-human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。[方法]通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR和southernblot鉴定。[结果]经300ug/ml的潮霉素B压力筛选后,获得了抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出相应的核苷酸片段,Southernblot鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞。[结论]本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。
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| 关 键 词： | NIHNIH3T3细胞 潮霉素B磷酸转移酶基因 转染 潮霉素B抗性 ES细胞 |
Establishment of a Hygromycin B Resistant NIH3T3 Cell Line as Feeder Layer |
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| Zhang Meiying,Li Hua,Dong Wanwei,Yang Wei,Qing Ying Wang ying Wang Luzeng Wang Taiyi Faculty of laboratory Animal,Chinese Medical University,Shenyang ,China. Establishment of a Hygromycin B Resistant NIH3T3 Cell Line as Feeder Layer[J]. Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica, 2005, 0(Z1) |
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| Authors: | Zhang Meiying Li Hua Dong Wanwei Yang Wei Qing Ying Wang ying Wang Luzeng Wang Taiyi Faculty of laboratory Animal Chinese Medical University Shenyang China |
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| Affiliation: | Zhang Meiying,Li Hua,Dong Wanwei,Yang Wei,Qing Ying Wang ying Wang Luzeng Wang Taiyi Faculty of laboratory Animal,Chinese Medical University,Shenyang 110001,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | NIH3T3 Cell Hygromycin B phosphofransferose gene Transfection Hygromycin B resistant ES Cell |
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