| 猪水泡病病毒VP1基因的克隆和表达 |
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| 引用本文： | 钟金栋 花群义 肖荣海 夏雪山 杨云庆 周晓黎 董俊 邓祖洪. 猪水泡病病毒VP1基因的克隆和表达[J]. Virologica Sinica, 2006, 21(4): 385-389 |
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| 作者姓名： | 钟金栋 花群义 肖荣海 夏雪山 杨云庆 周晓黎 董俊 邓祖洪 |
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| 作者单位： | 昆明理工大学生化学院 云南昆明650224(钟金栋，夏雪山)，云南出入境检验检疫局技术中心 云南昆明650228(花群义，肖荣海，杨云庆，周晓黎，董俊)，西双版纳兽医站 云南景洪666100(邓祖洪) |
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| 基金项目： | 国家“十五”重大科技攻关项目(2001BA804A48和2004BA519A40) |
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| 摘 要： | 以猪水泡病病毒RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了849bp的VP1基因,通过T-A克隆技术,将VP1基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中,构建SVDVVP1基因克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体,经测序鉴定,筛选获得VP1基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了猪水泡病病毒VP1基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP1蛋白抗原。SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.002%的L-阿拉伯醛糖进行诱导,5h后表达可达到高峰,表达蛋白为融合蛋白,质量约47.13kDa,表达产量约占菌体总蛋白的16%。Westernblotting检测表明,诱导的蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。融合蛋白中含有猪水泡病病毒VP1蛋白抗原,为应用该表达蛋白抗原制备SVD免疫血清学诊断试剂和新型疫苗构建奠定基础。
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| 关 键 词： | 猪水泡病病毒 VP1 克隆 表达 |
| 收稿时间： | 2006-02-13 |
| 修稿时间： | 2006-03-25 |
Cloning and Expression of VP1 Gene of Swine Vesicular Disease Virus |
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| ZHONG Jin-dong, HUA Qun-yi, XIAO Rong-hai, XIA Xue-shan, YANG Yun-qing, ZHOU Xiao-li, DONG-jun, DEN Zu-hong. Cloning and Expression of VP1 Gene of Swine Vesicular Disease Virus[J]. 中国病毒学(英文版), 2006, 21(4): 385-389 |
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| Authors: | ZHONG Jin-dong HUA Qun-yi XIAO Rong-hai XIA Xue-shan YANG Yun-qing ZHOU Xiao-li DONG-jun DEN Zu-hong |
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| Affiliation: | 1. Faculty of Bioengineering and Chemical Engineering, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650224, China; 2. Technology Center of Yunnan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Kunming 650228, China; 3. Xishuangbanna Veterinary Station, Jinghong 666100, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Swine vesicular disease virus(SVDV) VP1 gene Cloning Expression |
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