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人结核分枝杆菌特异性核酸探针制备及结核病PCR检测技术的初步临床应用
作者姓名:蔡宏 陈东徐治新  李君莲周文来
作者单位:新疆畜牧科学院兽医研究所 乌鲁木齐 830000;1.北京农业大学农业生物技术实验室 北京 100094;2.新疆结核病研究所 乌鲁木齐 830000
基金项目:新疆自治区科委自然科学基金
摘    要:采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis TB)染色体DNA为模板,选择位于插入片段IS6110中884~865和568~588碱基对处的两个片段为引物,扩增出317bp的特异性片段.将其克隆进pUCl9载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段。该片段经DIG标记,分别与11种分枝杆菌DNA进行Southern杂交,结果证明只与人型复合分枝杆菌发生杂交反应。利用该对引物建立的PcR检测拄术对74份结核病痰液标本进行检测,并与临床细菌快速培养结果相比较,发现48份临床阳性均为PcR阳性,在26份临床阴性标本中亦发现11份PCR检测阳性。将标本PCR产物与克隆探针进行杂交,显示两者结果完全一致。说明PCR检测体系结果可靠,其灵敏度明显高于目前临床所采用的方法,可作为一种常规技术用于结核病的临床检测。

关 键 词:人结核分枝杆菌.特异性核酸探针  PCR  结核病检测
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