影响火炬松胚性悬浮细胞原生质体的胚胎发生的因素

火炬松（Pinus taeda L.）是我国亚热带和部分地区最重要的绿化和造林树种。它的生长周期长，杂合程度高，难以用常规的杂文进行品种改良。建立火世松的原生质抗体胚胎发生体系，有可能、进而以遗传转化为基础进行火炬松等针叶树的品种改良。本研究以湖南省绍阳市的火炬松成熟种子为材料，建立胚性细胞悬浮系。将其培养至对数生长期，用1％RS、2．5％和0．2％Y－23的酶混各液分离原生质体，活力达90％以上（Fig.1)。纯化原生质体，在再生培养基上培养2天后，细胞壁再生（Fig.2)；6天后，（65％的原生质体第1次分裂（Fig.3)；培养3周后，形成小细胞团（Fig.4)；6周后，形成大细胞团（Fig.5)；8周后，形成胚性胚柄细胞团（ESM）（Fig.6)；10周后，形成早期体细胞胚（ESE）（Fig.7)；12周后，形成后期体细胞胚（LSE）（Fig.8)。火炬松原生质体胚形成过程中的关键结构是ESM，ESE和LSE。它们形成的最佳基本培养基是1．25LP培养基。再生培养基中高浓度的BA和低浓度的肌醇有利于ESM的形成，但不利于ESE和LSE厮。再生培养基中高浓度的BA和低浓度的肌醇有利于ESM的形成。但不利于ESF和LSE的形成；反之，低的BA和高的浓度的肌醇不利于ESM的形成，但有利于ESE和LSE的形成。因此，用不同的再生培养基对火炬松原生质体培养物所形成的ESM，ESE和LSE进行分步培养可能更有利于火炬松原生质体胚胎发生效率的提高。