| 抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体与其配体的相互作用 |
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| 引用本文： | 陈萍,邓健蓓,韩骅,苏成芝,药立波.抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体与其配体的相互作用[J].中国生物化学与分子生物学报,2000,16(4):430-433. |
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| 作者姓名： | 陈萍 邓健蓓 韩骅 苏成芝 药立波 |
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| 作者单位： | 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安 710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(39670695)资助 |
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| 摘 要： | 为了在大肠杆菌中表达纯化抗人 TNF- α单链抗体并检测其结合活性与中和活性 .利用GST融合蛋白系统在大肠杆菌中表达抗人 TNF- α单链抗体 E6Sc Fv;分离包含体后进行变性和复性 ,再用亲和层析法进行纯化 ;用 ELISA法和酵母双杂交系统检测 E6Sc Fv与配体的结合 ;用 L92 9细胞检测 E6Sc Fv对人 TNF- α细胞毒作用的中和活性 .经变性 ,复性与亲和层析 ,E6Sc Fv被纯化 ,在 SDS- PAGE上为单一蛋白带 ;体外结合与中和实验表明 ,表达纯化的 E6Sc Fv可与人 TNF-α结合并中和其细胞毒活性 ;进一步用酵母双杂交系统证明当表达于细胞内时 ,E6Sc Fv仍保持了与TNF-α相结合的能力 .
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| 关 键 词： | 人TNF-α 单链抗体 亲和层析 酵母双杂交 结合活性 中和活性 |
| 收稿时间： | 2000-08-20 |
| 修稿时间： | 2000年1月27日 |
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