| 重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3表达及对Hela细胞活性的影响 |
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| 引用本文： | 张丕桥,王继红,刘欣,褚丹,李庆伟.重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3表达及对Hela细胞活性的影响[J].生物工程学报,2009,25(5):686-694. |
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| 作者姓名： | 张丕桥 王继红 刘欣 褚丹 李庆伟 |
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| 作者单位： | 辽宁师范大学海洋生物功能基因与蛋白质组学研究所,大连,116029 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2007AA09Z428);;大连市重大科技攻关项目(No.2007E11SF051);;国家自然科学基金(No.30770297);;辽宁省博士启动基金(No.20061050);;辽宁省教育厅科技攻关项目(No.L05201);;大连市科技局优秀青年科技人才基金(No.2005J22JH050);;辽宁省教育厅创新团队项目(No.2008T102)资助~~ |
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| 摘 要： | 为研究重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3的抗肿瘤活性,确定其生物学地位及意义,本研究提取成体七鳃鳗(Lampetra japonica)口腔腺组织总RNA,经RT-PCR获得cDNA序列长度为357bp的目的基因片段,将其克隆于pET23b载体,获得带有组氨酸标签的分子量为15kD的基因重组蛋白rLj-RGD3的高效可溶性表达,通过组氨酸亲和层析纯化蛋白。采用MTT法检测不同浓度rLj-RGD3对bFGF诱导下的Hela细胞增殖的抑制作用,结果表明rLj-RGD3能显著抑制Hela细胞的增殖,IC50为2.6μmol/L。rLj-RGD3作用后的Hela细胞经Hoechst染色及DNAladder检测结果显示,细胞均发生凋亡。rLj-RGD3对Hela细胞黏附玻连蛋白(VN)作用的实验结果为有效抑制。采用Transwell细胞培养板对bFGF诱导下的Hela细胞迁移实验表明,rLj-RGD3能够抑制Hela细胞的迁移,且抑制率达60%。采用人工基质膜基质Matrigel及Transwell模仿体内环境研究rLj-RGD3对Hela细胞浸润行为实验显示,以bFGF为趋化剂的Hela细胞穿透Matrigel的...
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| 关 键 词： | 七鳃鳗 RGD模体 整合素 基因重组 抗肿瘤 |
| 收稿时间： | 2008/12/2 0:00:00 |
Expression and bioactivity effects to Hela of recombinant toxin protein rLj-RGD3 from Lampetra japonica |
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| Piqiao Zhang,Jihong Wang,Xin Liu,Dan Chu and Qingwei Li.Expression and bioactivity effects to Hela of recombinant toxin protein rLj-RGD3 from Lampetra japonica[J].Chinese Journal of Biotechnology,2009,25(5):686-694. |
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| Authors: | Piqiao Zhang Jihong Wang Xin Liu Dan Chu and Qingwei Li |
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| Institution: | Institute of Halobios Function Gene and Protein Science, Liaoning Normal University, Dalian 116029, China;Institute of Halobios Function Gene and Protein Science, Liaoning Normal University, Dalian 116029, China;Institute of Halobios Function Gene and Protein Science, Liaoning Normal University, Dalian 116029, China;Institute of Halobios Function Gene and Protein Science, Liaoning Normal University, Dalian 116029, China;Institute of Halobios Function Gene and Protein Science, Liaoning Normal University, Dalian 116029, China |
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| Abstract: | Lj-RGD3 was a toxin from the saliva gland of Lampetra japonica.To study the anti-tumor function of rLj-RGD3 and confirm its biological status and significance, we extracted total RNA from the saliva gland and amplified the cDNA of Lj-RGD3 by RT-PCR.The cDNA of Lj-RGD3 was 357 bp long and encoded a polypeptide composed of 118 amino acids including 2 cysteines, 17 histidines and 3 RGD(Arg-Gly-Asp) motifs.We cloned the cDNA into the plasmid pET23b, and expressed the recombinant protein rLj-RGD3 in Escherichia ... |
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| Keywords: | Lampetra japonica RGD-motif integrin gene recombinant anti-tumor |
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