| 黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究 |
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| 引用本文： | 谢珲,章先,王歆,凡鹏程,时玉菲,方维焕. 黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究[J]. 微生物学通报, 2015, 42(10): 2033-2040 |
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| 作者姓名： | 谢珲 章先 王歆 凡鹏程 时玉菲 方维焕 |
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| 作者单位： | 浙江大学动物科学学院 浙江省动物预防医学重点实验室 浙江 杭州 310058,浙江大学动物科学学院 浙江省动物预防医学重点实验室 浙江 杭州 310058,浙江大学动物科学学院 浙江省动物预防医学重点实验室 浙江 杭州 310058,浙江大学动物科学学院 浙江省动物预防医学重点实验室 浙江 杭州 310058,浙江大学动物科学学院 浙江省动物预防医学重点实验室 浙江 杭州 310058,浙江大学动物科学学院 浙江省动物预防医学重点实验室 浙江 杭州 310058 |
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| 基金项目： | 国家863计划项目(No. 2012AA101602) |
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| 摘 要： | 【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体，建立间接竞争ELISA检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠，经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备抗体，通过间接ELISA方法分别测定抗体亚类和效价。经优化实验条件，建立稳定的间接竞争ELISA检测方法，并用于检测饲料样品中的黄曲霉毒素B1。【结果】获得4株稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，选择3B9细胞株制备抗体，测定抗体亚类为IgG1，效价为1:204 800，与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.2%、33.9%、1.8%和4.1%，与赭曲霉毒素A、伏马毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。以此单抗构建了AFB1间接竞争ELISA检测方法，在AFB1浓度为1.04?25.00 μg/L范围内呈线性(R2=0.993 1)，检测限为1.04 μg/L，半数抑制率(IC50)为6.03 μg/L，平均加标回收率在线性范围内可达85%?120%，变异系数均小于10%。【结论】通过饲料样品检测证实，该方法与进口ELISA试剂盒检测一致性良好，可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检。
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| 关 键 词： | 黄曲霉毒素B1，单克隆抗体，间接竞争ELISA |
Preparation of anti-aflatoxin B1 monoclonal antibodies and its use in an indirect competitive ELISA for aflatoxin B1 |
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| XIE Hui,ZHANG Xian,WANG Xin,FAN Peng-Cheng,SHI Yu-Fei and FANG Wei-Huan. Preparation of anti-aflatoxin B1 monoclonal antibodies and its use in an indirect competitive ELISA for aflatoxin B1[J]. Microbiology China, 2015, 42(10): 2033-2040 |
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| Authors: | XIE Hui ZHANG Xian WANG Xin FAN Peng-Cheng SHI Yu-Fei FANG Wei-Huan |
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| Affiliation: | Zhejiang Province Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, College of Animal Science, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310058, China,Zhejiang Province Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, College of Animal Science, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310058, China,Zhejiang Province Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, College of Animal Science, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310058, China,Zhejiang Province Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, College of Animal Science, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310058, China,Zhejiang Province Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, College of Animal Science, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310058, China and Zhejiang Province Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, College of Animal Science, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310058, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Aflatoxin B1 Monoclonal antibody Indirect competitive ELISA |
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