| Hsh载体对外源基因在E. coli中高效表达的机制探讨 |
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| 引用本文： | 吴华伟,邵蔚蓝. Hsh载体对外源基因在E. coli中高效表达的机制探讨[J]. 微生物学通报, 2011, 38(9): 1355-1361 |
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| 作者姓名： | 吴华伟 邵蔚蓝 |
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| 作者单位： | 1. 长江大学生命科学学院 湖北荆州434023
2. 南京师范大学生命科学学院 江苏南京210097 |
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| 基金项目： | 长江大学博士启动基金项目(No. 801100010112) |
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| 摘 要： | pHsh是根据大肠杆菌的热休克反应构建而成的新型表达载体, 受σ32调控。正常E. coli细胞的整个热休克反应持续时间约12 min, 而在携带有外源基因的高拷贝pHsh的E. coli细胞中, 外源基因却能持续高效表达4?10 h。为探求外源基因高效表达的机制, 以一个编码木聚糖酶的外源基因为代表, 首先研究了质粒拷贝数对木聚糖酶表达的影响, 接着通过Western-blot检测了携带质粒pHsh-xynIII和对照组携带pLac-xynIII的E. coli细胞在非诱导条件下(30 °C)和诱导条件下(30 °C→42 °C)胞内σ32的差异, 最后测定了不同温度下(30 °C、37 °C、42 °C、30 °C→42 °C)携带质粒(pHsh-xynIII)的E. coli细胞内稳定状态下热休克的水平(以木聚糖酶活性表征)。研究结果表明外源基因在pHsh中的高效表达是与3个方面密切相关的: pHsh质粒的高拷贝数增加了外源基因的剂量; pHsh的存在使E. coli细胞内σ32的水平较正常E. coli细胞显著增加了, 并最终增强了E. coli的热休克反应; 诱导状态下带有pHsh重组质粒的E. coli细胞内稳定状态下的热休克水平明显高于其它温度的水平。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 pHsh载体 热休克 σ32 表达 |
Mechanism of high level expression of foreign gene caused by pHsh vector in Escherichia coli |
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| WU Hua-Wei and SHAO Wei-Lan. Mechanism of high level expression of foreign gene caused by pHsh vector in Escherichia coli[J]. Microbiology China, 2011, 38(9): 1355-1361 |
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| Authors: | WU Hua-Wei and SHAO Wei-Lan |
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| Affiliation: | 1. College of Life Sciences, Yangtze University, Jingzhou, Hubei 434023, China;2. College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing, Jiangsu 210097, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Escherichia coli pHsh vector Heat-shock Sigma32 Expression |
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