| 去除致癌基因的EB病毒潜伏膜蛋白1的重组腺病毒的构建及其免疫效果 |
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| 引用本文： | 贾俊岭,周玲,左建民,王琦,曾毅.去除致癌基因的EB病毒潜伏膜蛋白1的重组腺病毒的构建及其免疫效果[J].病毒学报,2003,19(3):245-248. |
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| 作者姓名： | 贾俊岭 周玲 左建民 王琦 曾毅 |
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| 作者单位： | 中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划);2001AA217091; |
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| 摘 要： | 为进一步研究利用EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)进行免疫治疗的可行性,构建了含有去除致癌基因的EB病毒LMP1片段(LMP1△)的穿梭质粒pAdTrack CMV LMP1△,将它与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1用电转染的方法共同导入大肠杆菌BJ5183中,在宿主菌重组酶的介导下进行同源重组。通过抗性筛选,获得含有重组腺病毒基因的质粒;然后再通过脂质体将重组腺病毒质粒导入腺病毒包装细胞HEK293细胞中,在HEK293细胞E1蛋白的反式作用下,病毒被包装。将包装病毒的细胞裂解上清进行PCR鉴定证实,病毒DNA中含有目的基因的特异性片段。RT PCR证明了外源基因在真核细胞中得以转录,免疫酶和Westernblot的结果也显示,LMP1△蛋白在真核细胞得到表达。将扩增后的病毒感染HeLa细胞,测定病毒滴度为3.0×109PFU/ml。为初步探讨其免疫效果,采用肌肉注射和滴鼻的方式感染Balb/c纯系小鼠,免疫酶检测其特异性抗体,LDH法检测特异性CTL的杀伤作用,结果发现,两种免疫途径均可诱发小鼠针对LMP1的特异性体液免疫和细胞免疫,而且Ad5作为免疫对照组的小鼠则没有引起相应的免疫反应。
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| 关 键 词： | 致癌基因 EB病毒 潜伏膜蛋白1 重组腺病毒 免疫效果 |
| 文章编号： | 1000-8721(2003)03-0245-04 |
The Construction of Recombinant Adenovirus Inserted with Modified Epstein-Barr Virus Latent Membrane Protein 1 and the Study of Its Immune Effect |
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| JIA Jun-ling,ZHOU Ling,ZUO Jian-min,WANG Qi,ZENG Yi.The Construction of Recombinant Adenovirus Inserted with Modified Epstein-Barr Virus Latent Membrane Protein 1 and the Study of Its Immune Effect[J].Chinese Journal of Virology,2003,19(3):245-248. |
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| Authors: | JIA Jun-ling ZHOU Ling ZUO Jian-min WANG Qi ZENG Yi |
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