用凝集素和非同位素标记底物测定核心α-1,6-岩藻糖转移酶及其应用 |
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引用本文: | 巨同忠,陈惠黎.用凝集素和非同位素标记底物测定核心α-1,6-岩藻糖转移酶及其应用[J].中国生物化学与分子生物学报,1996,12(1):47-52. |
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作者姓名: | 巨同忠 陈惠黎 |
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作者单位: | 上海医科大学,卫生部糖复合物重点实验室 |
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基金项目: | 国家自然科学基金,CMB基金,卫生部基金 |
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摘 要: | 报道了一个不需同位素和HPLC的α-1,6-岩藻糖转移酶(α1,6FuT,又称核心岩藻糖转移酶)的测定法,包括从正常人血浆提纯运铁蛋白,消化成带有天冬酰胺(Asn)的二天线N-糖链,去除外端唾液酸和半乳糖后,用生物素酰胺乙酰基团标记其Asn,并以此生物素衍生物标记的Asn-七糖的N-糖链为受体底物,GDP-L-岩藻糖为供体底物,用LCA柱吸附法分离岩藻糖化后的产物,再用HRp-Avidin交联物与柱上带有生物素的产物结合,此HRP-Avidin-生物素。岩藻糖化产物从柱上洗脱后测定HRP活力可代表α1,6FuT活力。此法在较宽的范围内,产物量与酶量和反应时间成正比.人肝细胞癌、亚硝胺诱发大鼠肝癌后期或用佛波酯(PMA)处理人肝癌细胞后,α1,6FuT增高,而用视黄酸或db-cAMP处理人肝癌细胞后,则该酶活力降低。
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关 键 词: | α-1 6-岩藻糖转移酶 核心岩藻糖 小扁豆凝集素(LCA) 肝癌 |
收稿时间: | 1996-02-20 |
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