螺旋霉素3-O-酰基转移酶基因的删除和主要产生螺旋霉素组分Ⅰ菌株的获得

螺旋霉素（SP）为16元环大环内酯类抗生素，含有螺旋霉素Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ个组分，其结构的差异为16元内酯环的C₃上分别连接羟基（SPⅠ）、乙酰基（SPⅡ）和丙酰基（SPⅢ）；SPⅡ和SPⅢ是在相同的3-O-酰基转移酶催化下SPⅠ进一步酰化的产物。SPⅠ、SPⅡ和SPⅢ在生物学活性方面无大差异。为简化螺旋霉素组分，便于今后对其结构进行进一步改造，根据碳霉素和麦迪霉素生物合成中的3-O-酰基转移酶序列，设计了简并性PCR引物，并采用SON-PCR（single oligonucleotide nested PCR）方法，从螺旋霉素产生菌S. spiramyceticus F21中进行特异性扩增，获得了螺旋霉素3-O-酰基转移酶基因（sspA）及其侧翼序列，共约4.3kb（其中的3457nt DNA序列已被Genbank收录，DQ642742）。采用DNA同源双交换技术对S. spiramyceticusF21中的sspA进行了删除。对螺旋霉素原株和sspA缺失变株进行发酵产物提取和HPLC分析表明：原株中SPⅠ、SPⅡ和SPⅢ的相对含量分别为7.8%、67%和25%，变株中则分别为72％、18%和9.6%；变株主要组分为SPⅠ。螺旋霉素sspA缺失变株的获得为螺旋霉素组分简化及其衍生物的结构改造奠定了基础。