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加载HCMV抗原肽的HLA-A*0201单体及其四聚体制备和鉴定
作者姓名:何贤辉  徐丽慧刘毅蔡小嫦  曾耀英
作者单位:1. 组织移植与免疫教育部重点实验室,暨南大学,广州,510632
2. 组织移植与免疫教育部重点实验室,暨南大学,广州,510632;暨南大学生物工程研究所,广州,510632
3. 组织移植与免疫教育部重点实验室,暨南大学,广州,510632;郑州大学第一附属医院皮肤科,郑州,450052
4. 暨南大学第一附属医院皮肤科,广州,510632
基金项目:国家自然科学基金重点项目 (No .3 0 2 3 0 3 5 0 ),国家重点基础研究发展规划项目 (“973”) (No .G2 0 0 0 0 5 70 0 6),广东省“十五”重大专项 (No .A3 0 2 0 2 0 2 0 4)基金资助~~
摘    要:细胞毒T淋巴细胞(CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用,因而特异性CTL的检测相当重要;而过去检测CTL的方法都是间接的,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法,成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序,利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒(HCMV)抗原肽的HLA-A2四聚体,具有特异性结合CTL活性。HLA-A*0201重链基因是通过RT-PCR方法从HLA-A2+供者白细胞中克隆,进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A*0201(A2)重链胞外区原核表达载体, A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达,主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链β2微球蛋白和HLA-A2限制性HCMV pp65495-503抗原肽(NLVPMVATV,NLV)存在时通过稀释法复性获得,以BirA对其进行生物素化,然后以阴离子交换树脂纯化,得到的纯化A2-NLV单体与Streptavidin_PE按4:08比例混合形成四聚体,结合程度在85%以上,流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA-A2+供者的特异性CTL结合活性。总之,这种简化的四聚体制备程序,不仅有利于该技术的推广,为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台,而且A2-NLV四聚体在临床监测CMV特异性CTL水平等方面也有应用价值。

关 键 词:人类白细胞抗原   四聚体   细胞毒T淋巴细胞   包涵体   人巨细胞病毒
文章编号:1000-3061(2004)03-0382-07
修稿时间:2003-10-16
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