对硝基苯纤维二糖苷(PNPC)结合于外切纤维素酶I(CBHI)时分子构型和构象变化的研究 |
| |
作者姓名: | 武彬 王禄山 高培基 |
| |
作者单位: | 山东大学微生物技术国家重点实验室,山东省农业科学院家禽研究所 济南250023,山东大学微生物技术国家重点实验室,山东大学微生物技术国家重点实验室,济南250100,济南250100,济南250100 |
| |
基金项目: | 国家自然科学基金(批准号:30370013和30500007)资助项目 |
| |
摘 要: | 以固定浓度的外切纤维素酶I(1,4-β-D-glucan cellobiohydrolase I,CBHI),对不同浓度的对硝基苯纤维二糖苷(p-nitrophenol-cellobioside,PNPC)在4℃下进行结合.以紫外线光谱、荧光光谱的变化和等温滴定量热法(isothermal titration calorimitry,ITC)分别确定酶的饱和结合位点数(saturation binding point,SBP).然后,对在4℃和SBP条件下,结合时形成的“PNPC-CBHI”复合物进行PNPC分子构型变化和CBHI分子构象变化的分析.结果表明,在水解反应不能进行的条件下,CBHI结合PNPC的反应是一个由负焓变(-△H)控制的不可逆的放热过程.结合可导致PNPC的构型转变为PNP(对硝基苯)分子构型,而CBHI的构象变化可循环发生.“PNPC-CBHI”复合物与CBHI和PNPC之间不存在可逆性的平衡过程,在酶分子不断循环进行的结合/解离过程中,由CBHI构象变化提供的能量,使PNPC分子不断转化为PNP分子构型,结合复合物解离出PNP与纤维二糖后,再生的CBHI才可与PNPC结合.并对这一结果应用于解释酶催化机理的普适性进行了讨论.
|
关 键 词: | 饱和结合点 外切纤维素酶I 对硝基苯纤维二糖苷 构象/构型 |
收稿时间: | 2007-10-19 |
本文献已被 CNKI 维普 等数据库收录! |
| 点击此处可从《中国科学C辑》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《中国科学C辑》下载全文 |