对硝基苯纤维二糖苷（PNPC）结合于外切纤维素酶I（CBHI）时分子构型和构象变化的研究

以固定浓度的外切纤维素酶I（1，4-β-D-glucan cellobiohydrolase I，CBHI），对不同浓度的对硝基苯纤维二糖苷（p-nitrophenol-cellobioside，PNPC）在4℃下进行结合．以紫外线光谱、荧光光谱的变化和等温滴定量热法（isothermal titration calorimitry，ITC）分别确定酶的饱和结合位点数（saturation binding point，SBP）．然后，对在4℃和SBP条件下，结合时形成的“PNPC-CBHI”复合物进行PNPC分子构型变化和CBHI分子构象变化的分析．结果表明，在水解反应不能进行的条件下，CBHI结合PNPC的反应是一个由负焓变（-△H）控制的不可逆的放热过程．结合可导致PNPC的构型转变为PNP（对硝基苯）分子构型，而CBHI的构象变化可循环发生．“PNPC-CBHI”复合物与CBHI和PNPC之间不存在可逆性的平衡过程，在酶分子不断循环进行的结合／解离过程中，由CBHI构象变化提供的能量，使PNPC分子不断转化为PNP分子构型，结合复合物解离出PNP与纤维二糖后，再生的CBHI才可与PNPC结合．并对这一结果应用于解释酶催化机理的普适性进行了讨论．