两种酶谱方法在κ-卡拉胶酶活性鉴定中的应用 |
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作者姓名: | 王飞飞 姚子昂 吴海歌 张胜霞 |
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作者单位: | 1. 大连大学生命科学与技术学院,大连,116622 2. 大连大学生命科学与技术学院,大连116622;中科院大连化学物理研究所,大连116023 |
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摘 要: | 对分离纯化后的κ-卡拉胶酶进行SDS-PAGE电泳和酶谱试验鉴定,比较κ-卡拉胶酶活性鉴定中的两种酶谱试验方法。一种是先进行非变性PAGE电泳,电泳完毕,将电泳胶与事先准备好的底物胶叠合在一起,35℃孵育液孵育。另一种是在此试验方法基础上进行改进,直接在电泳分离胶中加入0.2%底物,进行SDS-PAGE电泳,电泳结束,用TritonX-100将电泳胶复性,孵育液孵育。试验结果表明改进后的酶谱方法操作简单,具有良好的灵敏度和精确的定位。同时,利用改进后的酶谱方法对κ-卡拉胶酶活性进行了反应时间的研究,结果显示,反应时间为8 h时,降解条带最清晰,最有利于相似分子量酶的辨别。
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关 键 词: | κ-卡拉胶酶 酶谱 改进 孵育时间 |
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