| 酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化 |
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| 引用本文： | 徐灿,张震宇.酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化[J].生物技术通报,2012(5). |
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| 作者姓名： | 徐灿 张震宇 |
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| 作者单位： | 江南大学生物工程学院江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214122 |
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| 基金项目： | 高等学校博士学科点专项科研基金，国家自然科学基金，工业生物技术教育部重点实验室主任基金 |
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| 摘 要： | 以酿酒酵母基因组DNA为模板,根据CenBank上公布的酿酒酵母Ravlp基因(rav1)序列和表达裁体特性设计 特异性引物,PCR扩增得到4 074 bp的DNA片段,将PCR产物和原核表达栽体pET28a(+)同时进行双酶切；双酶切后的PCR产物和表达栽体进行连接,构建成重组质粒pET28a-ravl.再将pET28a-ravl转化到BL21( DE3)感受态细胞中.经IPTG 16℃低温诱导40h表达His-tag融合的Ravlp.诱导后的菌体进行超声波破碎,然后用GE healthcare公司的AKTA蛋白纯化仪和His Trap HP I mL亲和层析柱纯化目的蛋白.SDS-PAGE电泳分析和Western blot分析显示在155 kD有明显的条带,成功实现了Ravlp在大肠杆菌中的表达纯化.
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| 关 键 词： | 酿酒酵母 RAVE复合物 Ravlp 克隆 原核表达 蛋白纯化 |
Expression and Purification of Rav1p, a 155 kD Subunit of RAVE Complex from Saccharomyces cerevisiae |
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| Xu Can
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Zhang Zhenyu.Expression and Purification of Rav1p, a 155 kD Subunit of RAVE Complex from Saccharomyces cerevisiae[J].Biotechnology Bulletin,2012(5). |
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| Authors: | Xu Can Zhang Zhenyu |
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