| 对粉纹夜蛾高毒力cry9Eα基因的克隆及表达 |
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| 引用本文： | 孙永祥,刘廷辉,郭巍,王立光,孙伟明.对粉纹夜蛾高毒力cry9Eα基因的克隆及表达[J].微生物学报,2010,50(5). |
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| 作者姓名： | 孙永祥 刘廷辉 郭巍 王立光 孙伟明 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划(973计划)，国家自然科学基金，农业厅科技项目 |
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| 摘 要： | 目的]从本实验室分离的Bt4菌株中克隆cry9Eα基因,并研究其表达和杀虫活性.方法]以PCR-RFLP方法鉴定Bt4菌株含有cry9基因,然后以菌株Bt4的质粒为模板,利用全长引物F9EA/R9EA进行PCR扩增全长基因.结果]将目的片段插入到表达载体pET21b,得到大肠杆菌重组表达质粒pETcrygEa.转化E.coli BL21(DE3),诱导后表达130 kDa的蛋白,再将cry9Eα7基因连接到穿梭载体pSXY422b,电激转化HD73-(cry-),得到工程菌BioHD9Ea7,提取Cry9Ea7晶体蛋白,并进行生物活性测定.生物活性测定结果显示CrygEa7蛋白对粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)初孵幼虫具有高毒力,LC_(50)为0.044 μg/mL,而对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)初孵幼虫未显示活性.结论]克隆和表达了一个对粉纹夜蛾高毒力的基因cry9Eα7,并成功构建了工程菌BioHD9Ea7.
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| 关 键 词： | 苏云金杆菌 cry9Eα7基因 基因克隆 基因表达 杀虫活性 |
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