| 小鼠γ干扰素(mIFN-γ)基因克隆及其逆转录病毒载体的构建和转基因细胞系的建立 |
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| 作者姓名： | 殷俊 茅慧华 杨玲 李厚达 |
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| 作者单位： | 扬州大学比较医学中心,江苏扬州,225009 |
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| 基金项目： | 科技型企业技术创新基金 |
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| 摘 要： | 本研究自小鼠脾脏淋巴细胞中抽提总RNA,应用RT-PCR技术扩增出mIFN-γ基因,按常规方法构建T载体克隆,酶切鉴定,测序分析.结果表明:获得mIFN-γ基因全长为468 bp,与GenBank中已发表的mIFN-γ基因核苷酸同源性为100%.通过双酶切将该基因片段插入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,脂质体法共转染包装细胞293T ,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染L929细胞,72 h 后,加入Zeocin 进行筛选,挑选出能稳定表达抗性的细胞株,经RT-PCR检测出转基因L929细胞株中mIFN-γ基因的转录.结果表明: 构建了含mIFN-γ基因的重组逆转录病毒载体,并筛选出整合有mIFN-γ基因的L929细胞株,为基因治疗的后续研究和大鼠单克隆抗体的研制奠定了基础.
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| 关 键 词： | γ-干扰素 逆转录病毒 载体构建 筛选 |
| 文章编号： | 1000-7083（2008）01-0026-05 |
| 收稿时间： | 2007-06-21 |
| 修稿时间： | 2007-06-21 |
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