拟南芥吲哚—3—甘油磷酸合酶免疫分析 |
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作者姓名: | 刘新仿 李家洋 |
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作者单位: | 中国科学院遗传研究所 |
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基金项目: | 国家自然科学基金,国家杰出青年基金 |
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摘 要: | 吲哚3甘油磷酸合酶(IGS,indole3glycerolphosphatesynthase,EC4.1.1.48)在色氨酸与吲哚乙酸的生物合成途径中,催化生成吲哚3甘油磷酸。研究该基因的表达调控,对于阐明高等植物是如何调控色氨酸及生长素合成是十分重要的。利用已克隆的IGScDNA,构建了谷胱甘肽转移酶(GST,glutathioneStransferase,EC2.5.1.18)与吲哚3甘油磷酸合酶融合蛋白的表达质粒,并将其导入到在异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下能高效表达的IGS基因缺陷菌株trpC9800λKC大肠杆菌中。高表达的融合蛋白通过谷胱甘肽琼脂糖(glutathioneagarose)亲和层析和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化后,用以免疫兔子制备抗血清。免疫印迹法分析表明拟南芥(Arabidopsisthaliana(L.)Heynh.)四种常用生态型只合成一种分子量约为40kD的吲哚3甘油磷酸合酶蛋白。在Ag+、紫外线等逆境条件下,IGS含量都有较大幅度的增加,这说明IGS可能与植物的防御反应紧密相关。
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关 键 词: | 吲哚-3-甘油磷酸合酶,免疫印迹法,拟南芥 |
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