| uPA基因重组GFP-腺相关病毒载体质粒的构建及其表达 |
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| 引用本文： | 毕凌云,易著文,彭海宁,刘明俊,刘喜红,何庆南,党西强,吴小川,莫双红.uPA基因重组GFP-腺相关病毒载体质粒的构建及其表达[J].生命科学研究,2007,11(3):242-247. |
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| 作者姓名： | 毕凌云 易著文 彭海宁 刘明俊 刘喜红 何庆南 党西强 吴小川 莫双红 |
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| 作者单位： | 1. 中南大学,湘雅二医院,小儿肾脏病研究室,湖南省小儿肾脏病临床中心,中国湖南,长沙,410011
2. 湖南师范大学,生命科学学院,生物化学与发育生物学教育部重点实验室,中国湖南,长沙,410081 |
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| 摘 要： | 利用基因重组技术，用RT-PCR法从幼鼠肾脏获得uPA cDNA，再克隆到质粒pAAV-IRES-hrGFP的多克隆位点，构建重组质粒pAAV-hrGFP-uPA，通过酶切和DNA测序鉴定重组质粒的正确性，采用磷酸钙共沉淀法，以重组质粒pAAV-hrGFP-uPA和pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293细胞，产生具有传染性的病毒颗粒；用斑点杂交法测定重组病毒颗粒的滴度，再将此病毒颗粒体外转染到培养的肾小管细胞中，倒置荧光显微镜观察GFP的表达，用免疫组化法检测转染的uPA蛋白表达，结果表明：成功地构建uPA基因GFP-腺相关病毒重组质粒，病毒滴度达每mL 4×10^13病毒颗粒，60％～70％肾小管细胞感染了病毒颗粒，感染的肾小管细胞能稳定、高效表达外源uPA蛋白，为今后建立AAV-uPA基因治疗肾纤维化的模型奠定了良好的基础．
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| 关 键 词： | 腺相关病毒载体 基因转染 |
| 文章编号： | 1007-7847（2007）03-0242-06 |
| 修稿时间： | 2007-06-11 |
Construction and Expression of Recombinant Plasmid of Adeno-associated Virus Vectors with GFP Carrying UPA Gene in Renal Tubular Epithelial Cells |
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| BI Ling-yun,YI Zhu-wen,PENG Hai-ning,LIU Ming-jun,LIU Xi-hong,HE Qing-nan,DANG Xi-qiang,WU Xiao-chuan,MO Shuang-hong.Construction and Expression of Recombinant Plasmid of Adeno-associated Virus Vectors with GFP Carrying UPA Gene in Renal Tubular Epithelial Cells[J].Life Science Research,2007,11(3):242-247. |
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| Authors: | BI Ling-yun YI Zhu-wen PENG Hai-ning LIU Ming-jun LIU Xi-hong HE Qing-nan DANG Xi-qiang WU Xiao-chuan MO Shuang-hong |
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| Institution: | 1.The Department of Pediatrics, The Second Xiangya Hospital, Central South University, Hunan Province Clinical Center of Pediatric Nephrology,Changsha 410011 ,Hunan ,China;2. Key Laboratory of Protein Chemistry and Developmental Biology of Education Ministry of China, College of Life Seienees, Hunan Normal University, Changsha 410081, Hunan, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | uPA GFP |
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