| 人线粒体tRNALeu(UUR)及其突变体的基因克隆、表达和纯化 |
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| 引用本文： | 韩伟国,陈莉,刘静,查锡良,金由辛,王德宝.人线粒体tRNALeu(UUR)及其突变体的基因克隆、表达和纯化[J].中国科学C辑,2000,30(6). |
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| 作者姓名： | 韩伟国 陈莉 刘静 查锡良 金由辛 王德宝 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031;上海医科大学生物化学教研室,上海,200032
2. 中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,上海,200031
3. 上海医科大学生物化学教研室,上海,200032 |
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| 基金项目： | 中国科学院资助项目，中国科学院资助项目 |
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| 摘 要： | 将化学法合成的人线粒体tRNALeu(UUR)及其突变体(tRNALeu(M))基因分别连接到载体pGEM-9zf (-)中, 并转化到大肠杆菌JM109中得到两个转化体分别为Leu-W和Leu-M. 在IPTG的诱导下, tRNALeu(UUR)和tRNALeu(M)的表达量可达总小分子RNA的19.10%和17.76%. 经DEAE-sepherose CL4B柱层析可使它们的纯度提高3倍. 最后用15%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化, 并用大肠杆菌亮氨酰tRNA合成酶(LeuRS)分别测定了它们的氨酰化反应动力学常数. 结果显示, mtRNALeu(M)的Kcat / Km值约为mtRNALeu(UUR) 的1/5, 提示该突变可使mtRNALeu(UUR)的氨基酸接受能力明显下降.
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| 关 键 词： | 人线粒体tRNALeu(UUR) 突变体 基因克隆 表达 纯化 |
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