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依赖于DNA的RNA聚合酶与体外转录的研究I.酵母变异株20B-12 RNA聚合酶A和C的纯化及鉴定
作者姓名:张渝英 刘年娟 杨开宇
作者单位:中国科学院微生物研究所,北京
摘    要:从酵母变异株20B一12经过超声波处理、硫酸铵沉淀、DEAE纤维素和磷酸纤维素层析等步骤,纯化依赖于DNA的RNA聚合酶A和C,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的条带。其中不含Dnase、Rnas:和蛋白酶活力,无内源.DNA。测定了RNA聚合酶A和c对弘鹅膏蕈碱的敏感性。酶A在a-鹅膏荤碱为400μg/ml时,活性受到抑制,而酶c在该浓度时,几乎不受抑制。(NH4)zSO4对酶A的最适浓度为20mM,对酶C有二个最适浓度,分别为40raM和240raM。无二价金属离子Mn+或Mg2+,酶A和c几乎无活力。两种酶最适Mn2+浓度均为2.5mM,Mg2+浓度均为5mM。两种酶以热变性小牛胸腺DNA为模板,测活性均较天然小牛胸腺DNA为模板时高。

关 键 词:依赖于DNA的RNA聚合酶;酿酒酵母变异株20B-12;RNA聚合酶的纯化
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