| 盐穗木病程相关蛋白HcPR10抗血清的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 张 花,杨 涛,衡友强,王 艳.盐穗木病程相关蛋白HcPR10抗血清的制备及鉴定[J].广西植物,2020,40(12):1732-1739. |
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| 作者姓名： | 张 花 杨 涛 衡友强 王 艳 |
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| 作者单位： | 新疆大学 生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程重点实验室, 乌鲁木齐 830046 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31860061); 新疆生物资源基因工程重点实验室开放课题(2017D04026)[Supported by the National Natural Science Foundation of China(31860061); Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources Genetic Engineering(2017D04026)]。 |
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| 摘 要： | 病程相关蛋白(PRs)在植物抗病抗逆过程中发挥重要作用。盐穗木病程相关蛋白基因HcPR10(GenBank:KF673356)来自盐穗木(Halostachys capsica)在600 mmol·L-1 NaCl胁迫下的盐抑制差减文库。为探究盐穗木病程相关蛋白HcPR10发挥生物学功能的机制,该研究通过体外表达和纯化HcPR10重组蛋白制备特异性的HcPR10多克隆抗体。并采用双酶切构建原核重组表达载体pET28a-HcPR10,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21诱导表达,通过正交分析优化重组蛋白可溶性诱导表达的条件,利用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,基于纯化获得的His-HcPR10重组蛋白和转HcPR10拟南芥总蛋白,分别利用ELISA和Western Blotting检测抗血清效价和特异性。结果表明:成功构建重组表达载体pET28a-HcPR10; 正交结果显示诱导温度27 ℃,诱导转速200 r·min-1,IPTG浓度0.7 mmol·L-1,诱导时间6 h条件下可诱导表达大量可溶性目的蛋白; ELISA检测抗HcPR10血清效价达1:243 000,Western Blotting印迹结果显示制备的抗血清可以与重组蛋白和转基因拟南芥(Arabidopsis thaliana)中异源表达的HcPR10蛋白特异性结合。该研究获得了效价高、特异性强的盐穗木病程相关蛋白HcPR10抗血清,为进一步研究HcPR10的亚细胞定位及生物学功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 盐穗木病程相关蛋白HcPR10 原核表达 蛋白纯化 抗体制备及鉴定 |
| 收稿时间： | 2020/5/6 0:00:00 |
Preparation and identification of antiserum against HcPR10 from Halostachys caspica |
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| ZHANG Hu,YANG Tao,HENG Youqiang,WANG Yan.Preparation and identification of antiserum against HcPR10 from Halostachys caspica[J].Guihaia,2020,40(12):1732-1739. |
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| Authors: | ZHANG Hu YANG Tao HENG Youqiang WANG Yan |
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| Institution: | Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources Genetic Engineering, College of Life Science
and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pathogenesis-related protein 10 from Halostachys caspica(HcPR10) prokaryotic expression protein purification antibody preparation and identification |
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