| H9N2亚型AIVHA基因的原核表达及间接ELISA方法的建立 |
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| 引用本文： | 郑其升,刘华雷,张晓勇,周斌,曹瑞兵,任雪枫,李鹏,陈溥言. H9N2亚型AIVHA基因的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. Virologica Sinica, 2005, 20(3): 293-297 |
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| 作者姓名： | 郑其升 刘华雷 张晓勇 周斌 曹瑞兵 任雪枫 李鹏 陈溥言 |
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| 作者单位： | 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 江苏南京210095，江苏南京210095，江苏南京210095，江苏南京210095，江苏南京210095，江苏南京210095，江苏南京210095 河北省畜牧兽医站，河北保定071000，江苏南京210095 |
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| 摘 要： | 根据GenBank公开发表的禽流感病毒(AvianInfluenzaVirus,AIV)H9N2亚型血凝素基因(HA)序列设计引物,用PCR方法从重组质粒pUCHA中扩增H9N2亚型禽流感病毒去除信号肽的血凝素基因,将该片段定向插入到原核表达载体pET32a(+)中,构建原核表达载体pETHA。阳性质粒转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导,HA基因获得表达,经定位分析,目的蛋白以包涵体的形式存在于大肠杆菌中。通过改变IPTG的浓度和诱导时间,确定了表达HA基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.7mmol/L,诱导时间为3h。Westernblot分析表明,重组蛋白能与H9N2亚型AIV阳性血清发生特异性反应。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测H9亚型AIV抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被浓度为25μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:OD待检血清>0.5且OD标准阳性血清>1.0;OD标准阴性血清<0.1。
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| 关 键 词： | 禽流感病毒H9N2亚型、血凝素基因、原核表达、间接ELISA |
Prokaryotic Expression and the Establishment of a Putative Indirect ELISA Assay for the HA Gene of Avian Influenza Virus H_9N_2 subtype |
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| ZHENG Qi-sheng+,LIU Hua-lei+,ZHANG Xiao-yong+,ZHOU Bin+,CAO Rui-bing+,REN Xue-feng+,LI Peng+{,},CHEN Pu-yan. Prokaryotic Expression and the Establishment of a Putative Indirect ELISA Assay for the HA Gene of Avian Influenza Virus H_9N_2 subtype[J]. 中国病毒学(英文版), 2005, 20(3): 293-297 |
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| Authors: | ZHENG Qi-sheng+ LIU Hua-lei+ ZHANG Xiao-yong+ ZHOU Bin+ CAO Rui-bing+ REN Xue-feng+ LI Peng+{ } CHEN Pu-yan |
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| Affiliation: | ZHENG Qi-sheng+1,LIU Hua-lei+1,ZHANG Xiao-yong+1,ZHOU Bin+1,CAO Rui-bing+1,REN Xue-feng+1,LI Peng+{1,2},CHEN Pu-yan 1 ** |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Avian Influenza Virus (AIV) H-9N-2 subtype HA gene Prokaryotic expression Indirect ELISA |
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