| 盐单胞菌DSM 16354T中新型耐盐基因的克隆及解析* |
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| 引用本文： | 贾桂燕,王永杰,陈志康,陈星,殷奎德,李雯,王艳红.盐单胞菌DSM 16354T中新型耐盐基因的克隆及解析*[J].中国生物工程杂志,2022,42(3):27-37. |
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| 作者姓名： | 贾桂燕 王永杰 陈志康 陈星 殷奎德 李雯 王艳红 |
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| 作者单位： | 1 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院 大庆 1633192 黑龙江珍宝岛湿地国家级自然保护区管理局 虎林 1584193 黑龙江省寒区环境微生物与农业废弃物资源化利用重点实验室 大庆 163319 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金(31771692) |
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| 摘 要： | 目的: 嗜盐菌分布广泛且适应能力极强,为加强对嗜盐菌耐盐机制的探索与研究,从盐单胞菌Halomonas alkaliphila DSM 16354T中筛选出潜在的与耐盐有关的基因,对其进行生物信息学分析,并验证相关蛋白的生理功能。方法: 利用基因文库筛选和功能互补相结合的方法,通过与大肠杆菌(Escherichia coli)盐敏感缺陷株KNabc(ΔnhaA、ΔnhaB、ΔchaA)的耐盐功能互补实验,筛选出具有耐盐功能的蛋白编码基因,并通过荧光猝灭恢复实验测定蛋白的逆向转运活性以及底物亲和力。结果: 筛选得到两个具有耐盐功能的蛋白编码基因,生物信息学分析结果表明该基因编码来自于DUF1538(domain of unknown function with No.1538 family)家族功能未知的膜蛋白,分别命名为duf1和duf2。系统发育树分析结果表明,来自盐单胞菌DSM 16354T中的DUF1、DUF2属于一个独立的分支,预测这两个蛋白可能是DUF1538家族转运蛋白的新成员。对DUF1和DUF2的生理功能进行分析,发现duf1和duf2单独表达时均不具有耐盐碱能力,而共同表达时则表现出显著的耐盐碱功能,表明DUF1和DUF2两个亚基共同支持了蛋白的耐盐碱功能。蛋白的逆向转运测定活性结果表明双组份蛋白DUF1-2具有Na+(Li+、K+)/H+逆向转运活性。结论: 筛选得到的基因duf1和duf2共同表达时具有盐碱耐受功能以及逆向转运蛋白活性,这为筛选出新的DUF1538家族转运蛋白基因和进一步探究DUF1538家族转运蛋白功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 盐单胞菌 DUF1538家族 钠/氢逆向转运蛋白 克隆 生物信息学 |
| 收稿时间： | 2021-07-06 |
Cloning and Analysis of Novel Functional Genes in Halomonas alkaliphila DSM 16354 T |
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| JIA Gui-yan,WANG Yong-jie,CHEN Zhi-kang,CHEN Xing,YIN Kui-de,LI Wen,WANG Yan-hong.Cloning and Analysis of Novel Functional Genes in Halomonas alkaliphila DSM 16354 T[J].China Biotechnology,2022,42(3):27-37. |
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| Authors: | JIA Gui-yan WANG Yong-jie CHEN Zhi-kang CHEN Xing YIN Kui-de LI Wen WANG Yan-hong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | H alkaliphila DUF1538 family transporter Na+/H+ antiporter Clone Bioinformatics |
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