棉铃虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

以棉铃虫Helicoverpa armigera蛹为材料，通过硫酸铵沉淀分级分离、Sephadex G-200分子筛柱层析和DEAE-32离子交换柱层析纯化，获得聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰- β-D-氨基葡萄糖苷酶酶制剂。纯酶的比活力为2 678.79 U/mg。以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-β-D-GlcNAc)为底物，研究酶催化底物水解的反应动力学。结果表明：酶的最适pH为5.63，最适温度为55℃。该酶在pH 4～8区域较稳定，而在pH>8时能迅速失去活力；在50℃以下处理30 min，酶活力仍保持稳定，高于50℃，酶很快失去活力。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程，测得米氏常数Km为0.16 mmol/L，最大反应速度Vm为10.73 μmol·L^-1·min^-1。酶催化pNP-β-D-GlcNAc反应的活化能为66.24 kJ/mol。